PI单染 流式看活死比例

亚化石

机子用的是贝克曼的CytoFLEX，细胞诱导的坏死，PI单染看死细胞，总浓度是5ug/ml ，染色18分钟左右，是根据说明书来的。可以看看我的结果图吗？总感觉有地方不太对，为什么在P1门的伪彩图中，P2也就是死细胞（草绿色部分）会有部分出现在活细胞（深绿色）的下面，直方图也有点看不太懂了

niwanmao

染了18分钟没影响到活细胞，说明细胞活力还是挺好的。

从图上看，少量PI阴性出现在凋亡细胞FSC/SSC区域，只能说明这些细胞的膜还是完整的，这是允许存在的

亚化石

那为什么PI阳性细胞也会出现在正常细胞的FSC/SSC区域呢，老师，下次做的话，我可以怎么调整呢

niwanmao

亚化石 发表于 2024-6-13 15:46
那为什么PI阳性细胞也会出现在正常细胞的FSC/SSC区域呢，老师，下次做的话，我可以怎么调整呢 ...

前面说了呀，少量PI阴性出现在凋亡细胞FSC小的区域，只能说明这些细胞的膜还是完整的，这是允许存在的

麦小光

niwanmao 发表于 2024-6-13 17:36
前面说了呀，少量PI阴性出现在凋亡细胞FSC小的区域，只能说明这些细胞的膜还是完整的，这是允许存在的 ...

对的，只要细胞形态是完整的，哪怕膜通透性已经改变（PI可以进入），在FSC/SSC下看起来依然与正常细胞无异。这种情况挺常见的。

亚化石

niwanmao 发表于 2024-6-13 17:36
前面说了呀，少量PI阴性出现在凋亡细胞FSC小的区域，只能说明这些细胞的膜还是完整的，这是允许存在的 ...

老师，如果我也要这群细胞的话。可以通过调电压那些，调过去吗？还是我得单独给他画个门才可以，我之前看到一个帖子，图是这样的，这样的图一般得怎么调才可以得到呀

kkk158087

改坐标轴的通道就可以吧

niwanmao

亚化石 发表于 2024-6-20 09:12
老师，如果我也要这群细胞的话。可以通过调电压那些，调过去吗？还是我得单独给他画个门才可以，我之前看 ...

我不太清楚你们的研究目的是什么，但是通常来说，大多数科研文章都是直接圈PI阴性区域就认为是活细胞，然后FSC/SSC再圈目的细胞区域（如淋巴细胞区域），避开前述的凋亡区域的。因为尽管那些细胞PI阴性，但已经开始变形了，所以还是会尽量避开。

如果你一定要那些近凋亡的细胞，那么FSC/SSC门就把它们圈进去。