筛查血小板悬液细菌污染的新方法

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为什么要检测血小板悬液中的污染？
- 由于血小板混悬液在室温下储存，细菌更容易滋生，因此输血感染的风险很大。
- 细菌污染可导致输血相关的细菌感染和受血者败血症，具有很高的致死风险。
- 各类指南都建议对血小板悬液进行细菌污染筛查，以预防此类感染。
- 在一些国家，通过检测污染可将血小板悬液的保质期从 5 天延长至 7 天，从而改善血小板悬液制品的可用性。

为什么使用流式细胞仪检测污染？
- 能快速得出结果，可在给患者输血前进行筛查。
- 方法灵敏度高，能检测到低水平的细菌污染。
- 与其他一些方法相比，成本相对较低。
- 流式细胞术可对细菌进行定量分析。
- 可标准化，供血库常规使用。

流式检测的步骤
步骤包括几个关键步骤：
- 血小板裂解： 如果不裂解血小板或使用额外的荧光染料，细菌和血小板在流式上是无法分开的。故使用冻融法（在-80°C下冷冻15-20分钟，然后在室温下解冻），重复3次。
- 离心： 以 500 rpm 的转速离心 3 分钟，将溶解的血小板与细菌分离。
- 染色： 每 100 μl 样品使用 20 μl Syto 9（150 μM/ml）和 20 μl 碘化丙啶（400 μg/ml）。
- 孵育： 避光孵育15 分钟。
- 分析： 使用流式细胞仪获取信号，注意阈值和设门。


性能如何？
- 对于添加了标准菌株的样本：

• 培养 18 小时后： 浓度仅为1 -10 CFU/ml时，检测不到某些细菌。
• 培养 96 小时后： 除少数情况外，大多数细菌在所有浓度下都能检测到。
  

- 对于临床分离菌：

• 一般需要较长的培养时间（48-96 小时）才能检测到，尤其是在室温下。
  

- 常规样本：

• 80个样本中，BacT/ALERT系统识别出一个阳性样本，但流式未能检测出。
  

可见，该方法有前景，但需要优化培养时间和温度，才能进行可靠的检测。在实践中，流式细胞仪可用作筛选检测，但应与 BacT/ALERT 系统结合使用，以达到最佳的细菌污染检测效果。要可靠地检测出某些细菌，需要较长的培养时间，尤其是在室温下。

更多细节和讨论请进一步阅读：Bolat M, Hatipoğlu H, Köroğlu M, Toptan H, Altındiş M. Use of flow cytometry method to detect contaminations of platelet suspensions. World J Microbiol Biotechnol. 2024;40(7):222. Published 2024 May 30. doi:10.1007/s11274-024-04030-x