肿瘤细胞和T细胞共培养

Cecelia_y

想请教一下大家，为什么共培养之后流式上机出来的图是这样呢？太多碎片了，但是明明计数的时候在10-20um的峰还挺宽的
第一个图是我未激活脾脏细胞的图，第二个图是我激活之后的图，第三个是我共培养48h之后的流式图，我想问问为什么我共培养之后有这么多碎片呢，目的细胞看起来很少，但是根据后续杀伤情况来看，目的细胞是有的，而且活了还可以，请问长时间共培养之后细胞状态会不好吗？还是我处理样本的过程有问题呢？

niwanmao

共培养后，需有标记分出免疫细胞和靶细胞，再看各自的活力。只看FSC/SSC，很难帮你判断原因出在哪里。

麦小光

看图来说，没培养刺激之前的T细胞碎片也挺多的呀，是直接把研磨的脾脏细胞拿去做实验了么？肿瘤细胞的单独样本也跑一下流式看看。
一个是建议共培养之前做一下分选，磁珠分选纯化一下，不然碎片太多影响实验结果。使用不纯化的脾脏细胞，进行共培养的时候MOI比例是不准确的。
第二个是染一下Living/dead，把多余的死亡细胞和细胞碎片去掉。
第三个是给出给清晰的方法步骤以及实验目的，方便判断.
第四个建议和倪老师一样，建议加一个maker区分肿瘤细胞和免疫细胞，染一下CD45或者CD3之类的都可以，这样可以看一下死掉的细胞是来自于哪一个群体。

另外，刺激活化之后的T细胞本来就有细胞杀伤能力，进行共培养之后，肿瘤细胞正常来说会被杀伤，这是正常的，但是方法描述够清晰，无法进一步判断。进行共培养实验，刺激条件，时间，浓度，MOI，再到后面的检测都需要摸索好条件并优化才能达到满意的实验效果，建议做好预实验，切勿盲目直入。