求助小鼠肠道流式前处理protocol！！！

张帅帅帅超

孩子尝试了几种方法，发现提取不出来小鼠结肠的固有层免疫细胞！！哭了！求助！！

niwanmao

1. 采集并清洗结肠：
从小鼠体内取出结肠，清除脂肪残渣和粪便。将结肠纵向切开并分割成小块。

2. 去除上皮细胞：
将结肠碎片放入含 EDTA 的预消化培养基中，37°C 下剧烈振荡约 30 分钟。这一步骤有助于去除上皮细胞。

3. 清洗组织：
弃去上清液后，用 PBS 冲洗结肠片段数次，以去除残留的 EDTA。

4. 酶消化：
将组织放入含有胶原酶的消化培养基中培养。胶原酶的具体类型和浓度会影响细胞产量和活力。终浓度 100 U/mL的胶原酶 E 已被证明是有效的。用力振荡孵育约 45 分钟。

5. 富集固有层细胞：
使用 Percoll 梯度离心法富集固有层单个核细胞（LPMCs）。这一步骤有助于将免疫细胞与组织碎片分离。

6. 获得单细胞悬液：
梯度分离后，应得到固有层单个核细胞悬液，可用于流式细胞术等进一步分析。

不过具体方案可能需要根据特定的小鼠品系、年龄以及目的免疫细胞群进行优化。此外，在整个过程中保持细胞活力至关重要，因此在不进行消化的步骤时保持组织和细胞低温，有助于保持细胞的完整性。

Citations:
[1] https://star-protocols.cell.com/protocols/1621
[2] https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7759444/
[3] https://www.frontiersin.org/jour ... mu.2020.563414/full
[4] https://www.jove.com/v/59821/iso ... -murine-colon-using
[5] https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4942069/

张帅帅帅超

niwanmao 发表于 2024-6-28 13:38
1. 采集并清洗结肠：
从小鼠体内取出结肠，清除脂肪残渣和粪便。将结肠纵向切开并分割成小块。

谢谢老师谢谢老师！这就去学习准备！

AndyCheung

https://cn.bio-protocol.org/en/b ... 30782836&sort=3
https://cn.bio-protocol.org/en/b ... 30782836&sort=4