单核细胞HLA-DR定量，如何做室间比对？CV可达到多少？

niwanmao

背景

严重的免疫抑制是重症监护病房（ICU）患者受伤或危重疾病后的常见现象，这引起了人们对潜在的免疫刺激疗法的兴趣增加，如干扰素-γ（IFN-γ）、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和白细胞介素-7（IL-7），作为恢复这些患者免疫功能的一种手段。然而，这些疗法的疗效取决于能否准确识别出最严重的免疫抑制患者，这些患者很可能从这些干预措施中获得最大的益处。

迄今为止，通过流式细胞术检测循环单核细胞上人类白细胞抗原-DR(mHLA-DR) 的表达减少，已成为重症患者免疫抑制的可靠指标。因此，在评价免疫调节治疗的随机对照试验 (RCT) 中，mHLA-DR评估越来越多地用于患者分层。
随着该领域的多中心 RCT 越来越常见，确保不同中心的 mHLA-DR 测量一致和可重现变得至关重要。这对于以 mHLA-DR 表达作为入选标准的研究尤其重要，例如正在进行的 IGNORANT 研究 (NCT05843786)，该研究评价了IFN-γ在免疫抑制 ICU 患者中辅助治疗呼吸机获得性肺炎 (VAP) 的情况。

为了解决这一需求，法国的Gossez M等人进行了一项涉及法国9个中心的实验室间质量控制研究，评估使用标准化流式细胞术方案在不同实验室和流式细胞术平台上测量 mHLA-DR 的重现性。

研究设计
研究使用了3份稳定血样（通常用于常规淋巴细胞计数和质量控制），这些样本含有具有可测量水平 mHLA-DR 表达的单核细胞（尽管该参数未纳入生产商质量标准中）。在所有参与中心对样本进行盲法检测。

流式细胞仪
研究中使用的流式细胞仪包括：
1. Navios(Beckman-Coulter)
2. DxFLEX(Beckman-Coulter)
3. FACSLyric(Becton-Dickinson)
4. FACSCanto II(Becton-Dickinson)


数据分析
使用校准微球，根据整个单核细胞群的HLA-DR中位荧光强度计算结果。最终值报告为每个细胞结合的抗体数量 (AB/C)。每个中心对每份样本重复分析两次。

统计分析时，使用所有中心的所有值，计算出每个样本的中位数、标准差 (SD) 和变异系数 (CV)。然后根据平均值和 SD 计算每次测量的 Z 评分。

结果
参与中心各流式细胞术平台的 mHLA-DR 测量具有极好的重现性：
1. 所有样本的变异系数 (CV) 均低于9.2%。
2. 所有 Z 评分均在 [-3/+ 3] 的可接受范围内。
3. 仅一个值落在平均值的2-3个标准差之间，但仍保持在可接受参数范围内。


样本 A 结果
样品A（Multicheck，Becton-Dickinson，批号：BM034N）：
- 平均 mHLA-DR 表达：32461 AB/C
- 标准差：2270 AB/C
- 变异系数：7.0%

样品 B 结果
样品B（Multicheck Low，Becton-Dickinson，批次：BM3024L）：
- 平均 mHLA-DR 表达：25506 AB/C
- 标准偏差：2247 AB/C
- 变异系数：8.8%

样本 C 结果
对于样本C（Immunotrol，Beckman-Coulter，批次：7587289）：
- 平均 mHLA-DR 表达：19976 AB/C
- 标准偏差：1846 AB/C
- 变异系数：9.2%


参考文献：Gossez M, Bonnet B, Boussaid I, et al. Multicenter inter-laboratory quality control of monocyte HLA-DR expression by flow cytometry. Cytometry B Clin Cytom. Published online June 24, 2024. doi:10.1002/cyto.b.22196

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这篇真不错，补充一下原文PDF