细胞周期分不开什么原因

周熙正 · 发表于 2024-7-3 19:20:11

流式检测细胞周期，BD的PI/RNAse染色。仅为摸流式条件处理，无药物作用及接毒处理。

MDBK1x10*6铺用六孔板培养两天，

用1ml不含EDTA胰酶消化后，10%FBS终止消化，并制成细胞悬液，离心1500rpm 5min

弃上清液，2ml冷PBS吹打混匀，离心1500rpm 5min

弃上清液，用2ml 70%无水乙醇重悬细胞

-20度固定24h，1500rpm 5min离心弃固定液

2ml冷PBS吹打混匀，离心1500rpm 5min弃上清液

PI/Rnase 500 μL室温染45min过目300目上机PI通道检测。

Fish形影单只 · 发表于 2024-7-3 19:20:12

本帖最后由 Fish形影单只于 2024-7-9 15:00 编辑

我看了一下你的文件，你收集的时候参数选择的是指数，你要设置成线性。

niwanmao · 发表于 2024-7-3 20:27:28

你用的是什么机型？

wxd · 发表于 2024-7-4 08:42:36

从操作步骤和上传的图片上看不出有什么问题，有可能是参数设置或者分析过程中有问题，所以能不能上传一下原始数据看看。

周熙正 · 发表于 2024-7-4 14:34:15

niwanmao 发表于 2024-7-3 20:27
你用的是什么机型？

BD FACS VERS

周熙正 · 发表于 2024-7-4 14:37:59

已上传原始文件。感谢各位老师

周熙正 · 发表于 2024-7-10 15:20:24

Fish形影单只发表于 2024-7-9 14:53
我看了一下你的文件，你收集的时候参数选择的是指数，你要设置成线性。

感谢您！还有一个问题，制备流试样品固定后细胞沉淀正常嘛

Fish形影单只 · 发表于 2024-7-11 14:19:48

周熙正发表于 2024-7-10 15:20
感谢您！还有一个问题，制备流试样品固定后细胞沉淀正常嘛

固定后有沉淀，您是指加了酒精以后细胞结团吗？
酒精需要事先冻在-20°，样本先加100ulPBS重悬，在旋涡振荡器上一边震荡一边加酒精。这样不容易结团。

周熙正 · 发表于 2024-7-12 15:28:32

Fish形影单只发表于 2024-7-11 14:19
固定后有沉淀，您是指加了酒精以后细胞结团吗？
酒精需要事先冻在-20°，样本先加100ulPBS重悬，在旋涡振 ...

按照您的说法已经做出来啦谢谢您

HuiMinW99 · 发表于 2025-1-24 23:18:36

Fish形影单只发表于 2024-7-11 14:19
固定后有沉淀，您是指加了酒精以后细胞结团吗？
酒精需要事先冻在-20°，样本先加100ulPBS重悬，在旋涡振 ...

我也有这个问题，放冰箱过夜固定，拿出来的时候都不用离心，细胞已经自己沉在管底了。
我用的是碧云天的细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒，按照说明书的操作，是放在4ºC冰箱静置
所以我想问问-20℃怎么固定？还有那个边振荡边加70%的操作，尝试过一次，如果涡旋仪太猛了，会不会导致细胞破碎

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