细胞死活染料和抗体染色的先后顺序

白攸远 · 发表于 2024-7-3 21:34:45

想请教一下大家胺基类的死活染料（LIVE/DEAD）是在染抗体之前最先加入，还是像DAPI一样最后加？

CPUSnape · 发表于 2024-7-3 21:34:46

我的习惯是先染FVS，纯PBS体系内，非常重要!体系内不能有有游离胺基，然后用biolegend的cell staining buffer终止，离心后fc封闭，后面都是cell staining buffer体系，然后染抗体。先染抗体我试过，死活效果非常不好，要洗的比较干净，其中多了很多步骤。另外，如果你需要固定，当然是要先染FVS咯。

wxd · 发表于 2024-7-4 08:39:25

胺基类染料可能会跟抗体等蛋白发生非特异性结合，所以需要在染抗体前加入，并且染色体系内不能有蛋白存在。

wm170226 · 发表于 2024-7-4 10:42:40

我们一般是把FVS和Fc阻断剂放在一起，在最开始的时候染色。后面再做表染和核染/胞内染色。

白攸远 · 发表于 2024-7-26 16:47:06

谢谢大家，我也做了一个测试，发现先染L/D细胞活率大概80%。
如果先染抗体最后染L/D就会发现圈门很奇怪，死活细胞没有明显分群。

三更灯火 · 发表于 2024-8-7 11:38:33

我们是先封闭Fc，然后染死活，再染抗体，这样得到的效果最好

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