FMO的补偿及应用问题

wxc

我目前在做人PBMC中免疫细胞胞内因子检测，针对低表达的因子做了FMO。请问FMO组的补偿是直接应用全部抗体的补偿库然后手动微调还是再单独用FMO组对应抗体再做补偿去应用啊？话有一个问题。针对同一供体不同天数采集的样本检测，每次都需要进行FMO吗

Yuck

FMO就是为了全部抗体而存在，看补偿对染色通道的影响，不要动FMO组补偿。FMO是相当于全染组而做的，跟你培养那天没关系，你要想用FMO画门对照，一组样本做对应通道FMO

wxc

Yuck 发表于 2024-7-11 08:05
FMO就是为了全部抗体而存在，看补偿对染色通道的影响，不要动FMO组补偿。FMO是相当于全染组而做的，跟你培 ...

第二个问题我可能没有说清楚。我们的样本是直接从人血提取后做检测，采样是每隔一个月进行的，考虑到每次采样的质量问题，每次检测相同抗原表达的时候应该FMO还是要一起做的吧，第一次做的FMO不一定能很好的应用后面时间点的检测

niwanmao

wxc 发表于 2024-7-11 09:47
第二个问题我可能没有说清楚。我们的样本是直接从人血提取后做检测，采样是每隔一个月进行的，考虑到每次 ...

稳定性好的，可能基本上通用。但稳妥起见，每批次做的时候都做一个吧

wxc

niwanmao 发表于 2024-7-11 10:20
稳定性好的，可能基本上通用。但稳妥起见，每批次做的时候都做一个吧

谢谢老师。我还有几个问题想请教一下。现在我有A 、B 、C 、D、 E（T细胞胞内因子，连续性且表达强度低，同时占父群比例很低）多色染色，需要检测检测E的抗体灵敏度和较为准确的划去阳性群。
组1：空白
组2：FMO(E)
组3：FMO(E)+E的iso
组4：全染


所有组均未封闭。从图来看，与组2相比，组3是不是更合适作为阳性群划分的对照？我要是分析这个抗体的灵敏度是不是也要用组3的数据啊？如果我一开始就用封闭，理论上用组2去画群和去分离灵敏度也可以呀？

niwanmao

wxc 发表于 2024-7-12 09:09
谢谢老师。我还有几个问题想请教一下。现在我有A 、B 、C 、D、 E（T细胞胞内因子，连续性且表达强度低， ...

组3背景略偏强，做一下阻断可能会有点作用，阻断后可能组2和组3都可以

wxc

niwanmao 发表于 2024-7-12 10:48
组3背景略偏强，做一下阻断可能会有点作用，阻断后可能组2和组3都可以

感谢老师