小鼠脾脏巨噬细胞TNFa-FACS

zhangpengFACS

各位同仁们大家好，请教如下问题：
流式样本：小鼠脾脏裂红后的单细胞悬液（小鼠经LPS处理过，目的是小鼠脾脏炎性造模）


抗体选用CD45-PB/CD11b-PE/F4/80-APC/TNFa-FITC
巨噬细胞群体流式图很正常，CD11b low  F4/80+有很明显的一群，但圈出去之后去看TNFa的胞内水平，看不到阳性是什么原因呢？

niwanmao

用LPS刺激过吗？

zhangpengFACS

LPS腹腔注射BalB/C小鼠，6-8mg/kg，24h之后，死了2只，取活鼠的脾脏制备的单细胞悬液，裂红处理后染色处理的，收样all events 30w细胞左右，巨噬细胞有明显成群，占比5%左右，但就是圈出去之后没有TNFa+，但相对blank组有一些离散点，有百分之零点几，不知道真实不真实，blank组从single cell看TNFa的话一些离散点是都没有的，所以又觉得是真实的，陷入了纠结。
ps：实验的目的是得到一个模拟脾脏巨噬细胞炎性激活的小鼠模型~（或者除了LPS还有什么方法吗、）

niwanmao

zhangpengFACS 发表于 2024-7-25 08:49
LPS腹腔注射BalB/C小鼠，6-8mg/kg，24h之后，死了2只，取活鼠的脾脏制备的单细胞悬液，裂红处理后染色处理 ...

1、看文献中的浓度，LPS通常是1mg/kg
2、TNF-α产生的高峰时间是注射后2小时，那时就需收集腹腔积液，并收集脾脏细胞。

按上述方法调整看看

zhangpengFACS

关于LPS剂量的问题，是各文献都有不同的说法，高低都有，目前选用的记录是之前摸出来的半致死量。关于TNFa产生峰值的摸索还需要摸索，谢谢老师

刘传隆

楼主能看一下你最后巨噬的流式圈门图吗？

zhangpengFACS

刘传隆 发表于 2024-8-1 09:37
楼主能看一下你最后巨噬的流式圈门图吗？

小鼠脾脏巨噬细胞吗？其实没那么方便，我在公司，图片出来都是加密的，发出来也看不了，抱歉了