阴性峰值变强

zzzlll.

我们在做流式检测的时候遇到了一些问题，就是我们用的是带抗原的微球，在用纯阴性的微球＋标记抗体上机检测后，隐阴性峰在10的3次方左右，但是我用阴性和阳性微球掺了一个25%阳性的微球上机检测后可以看到明显的分群，但是阴性峰的荧光强度明显增强，想问一下该怎么排除可能的原因呢？

                               
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niwanmao

可能的原因：
1. FRET效应：
- 如果阳性和阴性微球非常接近，荧光素之间可能会发生能量转移，导致阴性群体的荧光增加。
2. 粘连：
- 阳性和阴性微球可能正在形成粘连体，导致阴性群体出现假阳性信号。
3.仪器设置：
- PMT电压或其他仪器设置确认是否有变化？

zzzlll.

niwanmao 发表于 2024-7-25 12:09
可能的原因：
1. FRET效应：
- 如果阳性和阴性微球非常接近，荧光素之间可能会发生能量转移，导致阴性群体 ...

非常感谢！第三条目前可以排除，请问第一条和第二条该怎么排除呢？通过fscA-FSC-H圈门排除吗

zzzlll.

niwanmao 发表于 2024-7-25 12:09
可能的原因：
1. FRET效应：
- 如果阳性和阴性微球非常接近，荧光素之间可能会发生能量转移，导致阴性群体 ...

阴性微球不带荧光，应该不会发生FRET效应；并且阴阳群分得很开，感觉第二条也可以排除，请问老师还有什么其他的猜想吗？我们有点绞尽脑汁了/(ㄒoㄒ)/~~

zzzlll.

这个是荧光的分群

13641140880

有可能和背景、仪器基线波动有关系；比如说跑纯阴性微球的时候，它的基线比较平稳，识别的阴性峰低一些；混入阳性后，它的基线噪声水平估计有些差异，从而导致该现象；猜测哈，供参考；我在做血样，发现洗涤和免洗的阴性对照也有类似现象所以联想到的，很难彻底解决，应该属于仪器底层的算法了，它也是真实反应测试效果。

niwanmao

13641140880 发表于 2024-8-2 11:38
有可能和背景、仪器基线波动有关系；比如说跑纯阴性微球的时候，它的基线比较平稳，识别的阴性峰低一些；混 ...

免洗和洗涤的背景差异，比较容易理解的，不是仪器基线波动，而是免洗的样本存在游离抗体和一些非特异性结合的抗体

像这里的微球，同样的处理理论上不应该有这么大的差异，所以很难推测原因

zzzlll.

已经找到解决办法了，但是具体原因还未知，我们将染色的buffer改为1% BSA并且用同样的buffer重选上机，即可解决。

niwanmao

zzzlll. 发表于 2024-8-7 13:52
已经找到解决办法了，但是具体原因还未知，我们将染色的buffer改为1% BSA并且用同样的buffer重选上机，即可 ...

那么就是非特异结合