用CD19，IL-10检测小鼠脾脏的Breg，IL-10需要刺激吗

hydwl2019

niwanmao

需要刺激，另外提醒一下，设门只用CD19是不够的

hydwl2019

niwanmao 发表于 2024-7-26 16:50
需要刺激，另外提醒一下，设门只用CD19是不够的

老师，需要再无菌条件下取出脾脏再分离淋巴细胞吗，用什么培养剂培养呢？1640？

niwanmao

hydwl2019 发表于 2024-7-26 17:49
老师，需要再无菌条件下取出脾脏再分离淋巴细胞吗，用什么培养剂培养呢？1640？ ...

需要无菌分离的。

培养可用RPMI-1640 培养基，通常添加以下成分：10% 胎牛血清（FBS）、 2 mM L-谷氨酰胺、 100 U/mL 青霉素、 100 µg/mL 链霉素、 50 µM 2-mercaptoethanol 。

常见刺激方法：
- PMA、离子霉素和脂多糖（LPS）的组合，一般刺激4小时[3]。
- B细胞受体（BCR）刺激：抗IgM抗体可用于通过BCR信号刺激IL-10的产生[2]。这似乎对新生小鼠CD19+CD43-B细胞特别有效。
- Toll样受体（TLR）激动剂：通常使用激活TLR4的LPS[5]。
- CD40配体：通过CD40刺激可以诱导IL-10的产生[5]。

另外，外源性细胞因子如IL-2、IL-35和IL-21可以增强Bregs中IL-10的表达[5]。

至于Breg标记物，虽然CD19和IL-10是关键标记物，但CD1dhiCD5+、TIM1+或CD9+等其他表面标记物可以帮助分出特定的Breg亚群[3]。
最佳刺激时间可能需要摸索。例如，一项研究发现，新生小鼠B细胞中IL-10的产生在刺激后12小时达到峰值[2]。
新生和成年小鼠B细胞对刺激的反应可能不同，新生B细胞通常表现出更高的IL-10产生能力[2]。


参考：
1.https://www.nature.com/articles/s41467-021-22230-z
2.https://elifesciences.org/articles/83561
3.https://www.nature.com/articles/s41467-023-44382-w
4.https://www.frontiersin.org/jour ... mu.2021.611795/full
5.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC9107325/