人全血流式图淋巴右侧存在分群

123451231245

不清楚是什么细胞，有的同事说是裂红问题产生的红细胞集团，想请教各位一下

123451231245

P7门所圈的蓝色细胞群

niwanmao

需要系列特异性标记确认

123451231245

niwanmao 发表于 2024-7-30 14:10
需要系列特异性标记确认

好的老师，那我再单独标记一下淋巴细胞？

btx362237729

溶血后没有离心吗，这么多碎片。或者是样本不新鲜。而且似乎收进去很多气泡。

123451231245

btx362237729 发表于 2024-7-31 09:05
溶血后没有离心吗，这么多碎片。或者是样本不新鲜。而且似乎收进去很多气泡。 ...

实验流程是孵育一抗，固定，清洗离心，破膜，孵育二抗，清洗离心，震荡孵育，样本是12h之后开始做的。

lyz113

123451231245 发表于 2024-7-31 09:53
实验流程是孵育一抗，固定，清洗离心，破膜，孵育二抗，清洗离心，震荡孵育，样本是12h之后开始做的。 ...

我觉得应该就是淋巴，我之前做破膜有时也会分两群，p7可能是破膜固定的效果不好，你可以看看胞外胞内抗体有没有染上p7的细胞，还有我感觉你的步骤有点奇怪，固定和破膜咋还是分开的？你这二抗是指胞内抗体还是和一抗结合的二抗？

123451231245

lyz113 发表于 2024-8-1 10:11
我觉得应该就是淋巴，我之前做破膜有时也会分两群，p7可能是破膜固定的效果不好，你可以看看胞外胞内抗体 ...

好的谢谢哈！一抗是表面抗体CD14和CD16，先固定十五分钟之后清洗，然后再破膜液孵育，二抗是胞内抗体

Fish形影单只

你换一个有固定作用的溶血素试试，应该就会没有了。或者离心以后不要加PBS重悬，直接用溶血素重悬上机。
我也不知道什么原因，有一段时间我用国产抗体染淋巴，溶血离心以后用PBS上机就会有这群细胞，用溶血素上机就没有。也不知道是抗体原因还是PBS原因，但是用BD的试剂就不会有这个问题，按道理FSC和抗体没关系啊。
你试完以后给我说一声，我们再沟通，我也想知道是什么问题。