流式检测临床患者中性粒细胞的指标，是否可以分批检测、放在一起分析比较？

Eniac

看到一篇文献，文章中检测了3名对照、5名初治患者中性粒细胞CXCR1和CXCR2的表达。我们也想检测患者中性粒细胞，但临床上指标合适的患者就诊时间非常随机，只能今天收一个样品、明天收一个样品。请问在这种情况下，可以在保证统一的染色流程、相同抗体使用量、相同的仪器参数、激发光强等情况下，分别检测，最终数据统一分析、放在一起比较吗？

niwanmao

下列方法可以二选一：
1、Ficoll提取中性粒细胞层，加入冻存液，梯度降温，冻到液氮，等到收集到一定数量，统一复苏进行检测。
2、到一个收一个做一个，如果仪器状态可确保稳定，可以直接按你的计划做；如果感觉对稳定性信心不足，那么每次做一次荧光定量微球标曲和样本检测，将CXCR1和CXCR2转换为绝对分子定量。

Eniac

谢谢老师的回答！因为中性粒细胞状态极不稳定，所以我们没有考虑冻存，但还是想问一下冻存是否会对中性粒细胞的检测结果造成较大影响？另外，荧光定量微球标曲和绝对分子定量我没有了解过，请问老师有相应的文献或资料推荐吗？谢谢老师！

niwanmao

Eniac 发表于 2024-8-5 22:02
谢谢老师的回答！因为中性粒细胞状态极不稳定，所以我们没有考虑冻存，但还是想问一下冻存是否会对中性粒细 ...

冻存批量做中性粒细胞的检测，我曾经看到过文献，但是具体哪篇忘记了

荧光定量微球有商品化的，例如Rainbow、Spherotech等厂家，买了之后按照他们的操作说明做就可以做绝对分子定量了

Eniac

好的，谢谢老师的回答！

Eniac

老师，请问如果想用流式检测ROS，使用DCFH-DA等荧光探针，是否也可以用荧光微球做绝对分子定量？

niwanmao

Eniac 发表于 2024-8-6 09:28
老师，请问如果想用流式检测ROS，使用DCFH-DA等荧光探针，是否也可以用荧光微球做绝对分子定量？ ...

这方面貌似没看到过相关应用，从原理上应该不容易的

Eniac

好的，谢谢老师。那么如果想分批做ROS的检测，请问有什么好的方法保证一致性吗？

niwanmao

Eniac 发表于 2024-8-7 09:21
好的，谢谢老师。那么如果想分批做ROS的检测，请问有什么好的方法保证一致性吗？ ...

ROS没办法，只能收了马上做，只能做好每个批次的阴性对照

Eniac

请问老师指的阴性对照是不加ROS探针的空白对照吗？我询问过一些流式老师，有老师给我建议是，每次都招募一位健康志愿者作为对照，但这样每次实验招募志愿者的经济成本和实验成本都比较高，很难实现。