过表达GFP的慢病毒转导人源T细胞后，流式检测不分群

风萧易水

我在使用慢病毒转导人源T细胞时，使用了不同的MOI以及摸索了病毒与T细胞孵育时间点。
流式检测时发现，转导组的细胞群整体右移，但是表达GFP的细胞没有明显分群，而且随着MOI的增大，病毒与T细胞孵育时间越长，细胞群右移越明显，但是细胞还是无法分群，请教下各位老师。

Yuck

为什么一定要分群？本来就是个连续表达。得多好的慢病毒才能做到在T细胞里定向转导某一群细胞而不转导表达另一细胞亚群呃

风萧易水

Yuck 发表于 2024-8-7 08:03
为什么一定要分群？本来就是个连续表达。得多好的慢病毒才能做到在T细胞里定向转导某一群细胞而不转导表达 ...

慢病毒转导T细胞肯定是有比例，比如有50%的细胞被转进去的话，就应该有50%的细胞表达GFP并分群。我在做逆转录病毒转导鼠源T细胞的时候，分群就很明显，不知道是什么原因

yacht

你是不是直接显微镜观察表达效率后再来做流式是不是更好一点？GFP表达显微镜观察不是更好？

niwanmao

有没有可能确实没转进去呢？

Yuck

风萧易水 发表于 2024-8-7 09:37
慢病毒转导T细胞肯定是有比例，比如有50%的细胞被转进去的话，就应该有50%的细胞表达GFP并分群。我在做逆 ...

鼠我做的少，人很少有区分群的，不是绝对没有是很少。跟人有关，跟细胞状态有关，跟转没转进去有关，跟表达有关。大概率是连续的。

风萧易水

Yuck 发表于 2024-8-8 08:11
鼠我做的少，人很少有区分群的，不是绝对没有是很少。跟人有关，跟细胞状态有关，跟转没转进去有关，跟表 ...

好的，谢谢您的回复，这几个方面我也考虑下。

风萧易水

yacht 发表于 2024-8-7 11:19
你是不是直接显微镜观察表达效率后再来做流式是不是更好一点？GFP表达显微镜观察不是更好？ ...

显微镜下确实也没观察到

风萧易水

niwanmao 发表于 2024-8-7 14:08
有没有可能确实没转进去呢？

这也是有可能的，后面我准备加点转导增强剂试试。现在唯一不理解的就是，慢病毒加的越多或者病毒和细胞孵育时间越长，细胞群右移就越明显，这是转导后细胞自发光造成的吗？

niwanmao

风萧易水 发表于 2024-8-8 11:03
这也是有可能的，后面我准备加点转导增强剂试试。现在唯一不理解的就是，慢病毒加的越多或者病毒和细胞孵 ...

可能性很大