免疫缺陷鼠外周流式

abbie

各位老师好，本人是新手小白。
图1是c57外周血流式图，图2是相同程序跑的免疫缺陷鼠外周血流式图，请问出现cd3和cd19双阳性细胞的原因可能是什么？这群细胞的形状也很奇怪。补偿已调成横平竖直。
流式上机前操作：
取100-150ul眼眶血，加入1ml ACK(thermo)裂红，冰上/常温裂红10min，800g离心5min，PBS洗一次，二次裂红5min，离心，PBS洗一次；抗体冰上避光敷育30min，用含2% FBS的PBS洗两次，500ul含2%  FBS的PBS重悬细胞上机。
mCD45-APC，mCD3-FITC，mCD19-PE，mNK1.1-PC7

abbie

使用的是贝克曼的仪器

niwanmao

手机拍照的时候，可调低分辨率，可以避免屏幕条纹的出现，看这两张图晃眼

至于第2个图的原因，不太好说，请逐步排查：
1、第2个样本是否和第1个样本同一天跑的？
2、第2个样本跑的当天，仪器是否做过质控？

abbie

niwanmao 发表于 2024-8-9 07:44
手机拍照的时候，可调低分辨率，可以避免屏幕条纹的出现，看这两张图晃眼

至于第2个图的原因，不太好说， ...

老师您好，我重新上传了flowJo的图片，图1是C57，图2是免疫缺陷鼠，图1和图2是同一次跑的结果；图3是与图2相同的一只免疫缺陷鼠上一次跑的结果。
1、流式程序是一样的。图2和图1是本周周四同一天跑的，图3是本周周二跑的。
2、贝克曼仪器7月中旬工程师来做过质控后就没有再质控了。

三更灯火

是用抗凝管采的外周血吗？肝素还是EDTA。另外相同程序，补偿都调过了吗？我们实验室的流式每次补偿都会有点差异。

abbie

三更灯火 发表于 2024-8-9 11:16
是用抗凝管采的外周血吗？肝素还是EDTA。另外相同程序，补偿都调过了吗？我们实验室的流式每次补偿都会有点 ...

用的EDTA抗凝管，补偿调过了

lifeng0711

有个脑洞的想法，会不会是基因缺陷鼠的细胞和正常鼠的细胞区别比较大，用正常鼠调的补偿，不太适合基因缺陷鼠的呢。图2太像我没调好补偿的样子啦

毛豆24821

abbie 发表于 2024-8-9 09:09
老师您好，我重新上传了flowJo的图片，图1是C57，图2是免疫缺陷鼠，图1和图2是同一次跑的结果；图3是与图 ...

图2的CD3CD19双阳的群SSC很大，不是淋巴细胞。

Climber

死细胞的自发荧光？

毛豆24821

毛豆24821 发表于 2024-8-9 15:18
图2的CD3CD19双阳的群SSC很大，不是淋巴细胞。

另外样本活率好吗？建议在活细胞里圈门。