做细胞周期的一点点心得

stef1981

做了很多细胞周期，有的很好，有的比较差，有一点点心得分享给大家。细胞本身状态是一个原因，后期处理也很重要，首先固定的时候细胞要吹散，我们是边加乙醇边振荡。除了PI，RNase很重要，其它可以不加，染色时间长一些好些，放上1个小时以上效果更好。附两张图，同一个样本，处理方法不同，结果差异很大。
较差，峰比较宽，CV值大
较好，峰窄，CV值小

楼楼

我们这边有位老师通过做胸腹水的细胞周期来看是否有肿瘤细胞，他的诊断率比病理科还高，现把他的秘诀跟大家分享下，临床比较实用：1）、收集胸腹水量多，最好用大瓶子装，使其自然沉降一部分细胞；2）、浓缩，采用FOCOLL分离后收集的细胞； 3）、肿瘤细胞体积较大，选细胞的时候比普通细胞大；4）、收集、分析的时候多位置移动，避免漏掉量少的肿瘤细胞。

stef1981

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是要沉一两分钟，收集悬浮液中层的细胞，准确性高些

haven_t

楼楼 发表于 2011-10-12 21:48

                               
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我们这边有位老师通过做胸腹水的细胞周期来看是否有肿瘤细胞，他的诊断率比病理科还高，现把他的秘诀跟大家 ...

有3点想咨询一下：1）FOCOLL分离的是自然沉降的细胞还是沉降后的上清液。2）单凭DNA含量来判断肿瘤细胞会不会有点草率。3）病理是否也是用这种方法富集细胞的。

楼楼

FOCOLL分离自然沉降的细胞，肿瘤细胞都是多倍体或异倍体，病理科采用离心后涂片染色，肿瘤细胞量少的标本容易漏检。

叶绿素

细胞要吹散很重要，减少粘连在一起的细胞，但是染色那么久好吗？

jingweis530

想问一下，1.很多时候G2∕G1很难做到1.9―2.1。是操作问题还是仪器线性问题，还是说它是异倍体？  2.不是说加了PI很容易引起细胞聚集，染色放这么长时间合适吗？

niwanmao

jingweis530 发表于 2012-2-1 15:13

                               
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想问一下，1.很多时候G2∕G1很难做到1.9―2.1。是操作问题还是仪器线性问题，还是说它是异倍体？  2.不是说 ...

我个人的看法是这样的：
1、G2/G1的比例要做到2左右，必须在取的时候调节好，使G1峰的尖在200道附近，所以还是获取上的问题。
2、加PI细胞容易成团，但是我觉得1个小时问题倒也不大，最关键的上机前要注意多混匀几次，假如有团块就得过滤一下。我在平时做的时候大概30分钟以内上机的。

niwanmao

叶绿素 发表于 2012-2-1 14:01

                               
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细胞要吹散很重要，减少粘连在一起的细胞，但是染色那么久好吗？

染色1小时以上的我曾经也做过，分得还是清楚的，但是跟1小时内的标本没做过对比，不知道有没有差别。

jingweis530

获取数据时已经严格把G1峰的尖调在200道，但G2/G1的比例还是未能做到2左右，很多时候都是1.85左右，反而2.0以上比较少见。一批标本中大多数是这种情况，但有时也有个别是1.9几的，所以很难解释是仪器线性问题，纠结。