CAR-T中CD3的检测

zhangpengFACS

各位同仁，针对CAR-T，其中一项编辑是TCR的敲除，通过流式去检测CD3（如果还有其他方法麻烦请告知），怎么保证流式的灵敏度呢，比如说我CD3+%有0.5%，怎么保证不是非特异，而就是这么多表达，说明我KO成功呢？说白了就是怎么通过流式检测TCR的敲除使得其灵敏度在0.1%的级别呢，甚至更低呢？目前想到的办法就是掺入不同比例的CD3-的细胞去测不同克隆号的CD3抗体，以及采用多收events的办法，还有什么办法呢，希望得到分享，谢谢大家

niwanmao

1、如果希望灵敏度0.1％，那么至少需获取10万个有效的细胞信号，从数量上保障
2、为了确保特异性，可同时加入CD4、CD8，确认T细胞来源
3、可加入死活染料，排除死细胞影响

目前大概想到这些办法

zhangpengFACS

收到，谢谢老师，我们目前打算拉一下细胞量events的收样梯度，看看能不能达到目的