小鼠中性粒细胞percoll富集

养老院VIP少女

各位老师同学们，在富集小鼠骨髓中性粒（BMDN）方面出了问题，求大家解答

• 富集方法62%/82% percoll, 9ml percoll原液（sigma）+1ml 10XDPBS配成SIP，3.1ml SIP+1.9 ml DPBS=62% percoll, 4.05ml SIP+0.95 ml DPBS=81% percoll
• 实验步骤：骨髓细胞提取（略），用的DPBS冲骨髓，400g*10min离心，裂红，终止裂红，离心，4ml DPBS重悬。
• 15ml离心管（康宁）：由管底部到上3ml 81% percoll, 3ml 62% percoll, 2ml 细胞。2500g*20min*4℃（升2降0，水平转子）。(加完两密度percoll看不出来界限正常吗？)
  

问题：

• 离心后，两密度percoll之间没有细胞层，细胞层在62%和DPBS之间。流式分析这部分细胞NEU的纯度30%，这跟没富集一样，哪步有问题啊？
• 有一篇22年的帖子用percoll分离肿瘤组织中的免疫细胞，在下做过，从未成功这percoll到底谁用成功了啊有什么注意事项吗
  

Fish形影单只

你要不试试反过来富集？直接用淋巴细胞分离液把淋巴细胞和单核细胞去除掉，然后把沉淀裂红。
肿瘤组织中的免疫细胞太少了，分离是有困难的。主要是组织太小，肿瘤大了伦理又过不去。我之前都是机械研磨然后用淋巴细胞分离液富集。我看爱必信新推出了一款组织解离试剂，abs9482。看销售给我的图效果还不错，你可以试试。我最近没有组织样本，等有了我也想试试。