一直在做小鼠结肠的流式，之前单细胞的制备一直不太稳定，一个样好的话一般能收到几十万，差的话几万，有时候好几个样细胞全都死了。前段时间做了一次，4只，提高了一倍消化酶的浓度，结果细胞数非常好，最多的能到250万，其他几个也有100多万。但是到正式实验，20只，一样的流程，细胞数又只能到几十万。最大的问题就是不稳定，每次做都和抽奖似的，完全不受控制。我推测可能是小鼠多了，处理的时间还有精细度有所减退导致的，但老鼠还必须这么多，而且一天杀。我考虑后面缩短一些洗的步骤来减少下时间不知道可不可以。
而且两次正式实验（隔了一天），一样的操作，Lin差别还挺大的（我们是做ILC3的，Lin里是CD3、B220、CD11b、Gr1、CD11c）。
另外染的NKp46效果也不好，阳性都在死细胞里，第一张是没过死细胞的，第二张是滤过了死细胞的，浓度1：100，之前1：800效果也不好
想请教一下做小鼠肠道流式的老师，师兄师姐，关于小鼠结肠单细胞的制备以及上面几个抗体的染色，有没有独到的见解。万分感谢！！
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发表于 2024-8-18 10:05:12
