将THP-1细胞诱导为M0→M1→M2的一些关键细节

niwanmao

图片引用自：https://www.caltagmedsystems.co.uk/information/pma-standard-reagent-for-thp1-cell-differentiation/

为了成功地将THP-1细胞诱导成M0巨噬细胞，并随后将其极化为M1或M2巨噬细胞，需要考虑以下几个关键因素和方法：

THP-1细胞向M0巨噬细胞的分化
1. PMA诱导：通常使用佛波酯(PMA)将THP-1单核细胞分化为巨噬细胞样细胞。常用方法是将THP-1细胞与25~100 nM的PMA孵育24小时。之后，将细胞在RPMI培养基中继续培养24小时，以使其稳定并成熟为M0巨噬细胞。
2. 细胞培养条件：在含10%胎牛血清、10 mM Hepes、1 mM丙酮酸盐和50 µM β-巯基乙醇的RPMI 1640培养基中维持THP-1细胞。这种环境有利于细胞的最佳生长和分化。

向M1巨噬细胞极化
1. 诱导条件：要将M0巨噬细胞极化为M1巨噬细胞，将分化后的细胞与20 ng/ml的IFN-γ和10 pg/ml的LPS孵育24小时。这种组合对于激活经典巨噬细胞通路、增强促炎反应至关重要。
2. 标记物表达：M1巨噬细胞特征是高水平的促炎细胞因子和表面标记物如CD86。然而，检测CD86可能具有挑战性；因此，可能需要优化流式细胞术方法或使用替代检测方法。

向M2巨噬细胞极化
1. 诱导条件：对于M2极化，用20 ng/ml的IL-4和20 ng/ml的IL-13处理M0巨噬细胞24至72小时。延长孵育时间（48-72小时）往往会增加M2标记物如CD206、IL-10和CCL18的表达，可以通过流式细胞术进行确认。
2. 检测挑战：与M1标记物类似，检测CD206（常见的M2标记物）也可能存在困难。确保适当的抗体滴定和使用优化的染色方法可以帮助提高检测灵敏度。

一般注意事项
- 细胞密度和健康状况：初始细胞密度可显著影响分化和极化结果。较高的接种密度（例如，1 × 10^6个细胞/孔）可能有助于维持细胞形态并降低脱落率，这有利于获得一致的结果。
- 监测和调整：定期观察细胞形态和活力，根据需要调整培养条件以维持最佳生长和分化。

此外，我们论坛上的站友@danieladaniela 分享了他自己宝贵的经验：

1. 首先，THP-1诱导分化为巨噬细胞这个实验真的是很难做，THP-1是本实验最大的变量，以本人经验
   
2. 1. M1诱导是比较稳定的，CD86表达85%以上，CD86的极化程度和LPS浓度相关
   
3. 2. M2比较难诱导，比例10%左右，文献报道，降低PMA的浓度、M0后静息，有利于M2方向诱导
   
4. 3. 细胞因子严格分装，勿反复冻融，以减少实验的干扰项
   
5. 4. 实在不行，及时更换新的THP-1（1个月-1.5个月新复苏）

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参考资料：
[1] https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0022175919303461
[2] https://bmccancer.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12885-015-1546-9
[3] https://www.frontiersin.org/journals/pharmacology/articles/10.3389/fphar.2018.00071/full
[4] https://www.mdpi.com/2073-4409/12/10/1427
[5] https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5851575/
[6] https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2405580822001832
[7] https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/cam4.6681

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