楼上的建议并不绝对，建议先用流式验证一下你所要用的组织在处理成单细胞悬液后的活性如何，以及CD4、CD8群体的比例。如果是脾脏、淋巴结、血等免疫细胞多又不需要消化的器官，更推荐磁珠分选。以下情况建议可以尝试流式分选：1.组织由于处理、时效等原因CD4、CD8细胞中死细胞比例超过20%，这种情况下磁珠分选需要额外做去死细胞步骤，分选成本会明显增加，流式分选可能效果更好。2. 这两种群体占比较低，如少于1%，这种情况下磁珠分选的纯度会受限，而且丢弃的细胞也较多，这种情况下用流式分选纯度更高效果更好。
另外也要考虑一下你们流式中心用的机型和是否有有经验的工作人员帮助上机，这些对于分选的效果和分选的时长都有一定影响。流式分选的活性不高这个并不绝对，我们平时分选离心后免疫细胞的活率都可以达到90%-95%。另外长时间分选是否对收集仓采取冷却措施影响也很大，如果需要的细胞量不多（10万左右或更少），可以考虑直接分到测序公司指定的细胞裂解液里，就不用考虑放置时间较长导致细胞死亡的问题了。
总之，如果有条件的话，推荐做一个完整的预实验，看看两种方式哪一种更合适自己的样本，包括纯化下来的细胞流式分析去看一下活率和CD4、CD8的纯度，可能会使你的实验达到最好的效果。 |
发表于 2024-9-11 11:19:33
