肺巨噬细胞圈门

cz1206

各位站内的老师想请教一个问题：做新生鼠肺巨噬细胞完成样本制备后上机，去黏连和圈出死活以后，用CD64和F4/80圈出肺巨噬细胞。最近发现这群细胞里又分了群，但不知道这群细胞是社么。两次实验不同的地方就是换了个离心机。望群里老师指导。

h1030506

两份样本应该不是同时处理的吧，感觉第二份样本处理后状态稍微差一些的样子，有试过选这个群看一下在FSC/SSC和在Live/Dead的位置吗？

cz1206

h1030506 发表于 2024-9-18 15:30
两份样本应该不是同时处理的吧，感觉第二份样本处理后状态稍微差一些的样子，有试过选这个群看一下在FSC/SS ...

这两份样本不是同时处理的，第二份把这群圈出来，感觉细胞活性还行。

niwanmao

cz1206 发表于 2024-9-18 15:58
这两份样本不是同时处理的，第二份把这群圈出来，感觉细胞活性还行。

我个人觉得，中间密度高的，可能还是此次非特异性本底，你可以尝试做Fc阻断后再染，是不是会消失

cz1206

niwanmao 发表于 2024-9-18 16:09
我个人觉得，中间密度高的，可能还是此次非特异性本底，你可以尝试做Fc阻断后再染，是不是会消失 ...

倪老师您好，所有样本都是经过Fc阻断以后进行后续染色的。

niwanmao

cz1206 发表于 2024-9-18 21:14
倪老师您好，所有样本都是经过Fc阻断以后进行后续染色的。

单纯从FSC/SSC看，这管碎片多了很多，如果fc已经阻断，那么只能考虑样本本身状态或者处理时导致细胞活性受影响导致了，无论是碎片还是细胞的大小和颗粒度都变化蛮大

h1030506

你看下2次样本中红色门内细胞群的位置是否接近呢？如果接近的话应该是样本处理过程中的差异导致的。

范晋波

状态不一的自发荧光差异和背景干扰引起的差异，强阳的那部分应该是你要的，如果样本都能分开，也不影响结果。

cz1206

h1030506 发表于 2024-9-19 11:24
你看下2次样本中红色门内细胞群的位置是否接近呢？如果接近的话应该是样本处理过程中的差异导致的。
...

老师您指的红色门圈出来位置相近的意思是指他们圈出来在哪两个marker上的位置？

cz1206

范晋波 发表于 2024-9-24 17:08
状态不一的自发荧光差异和背景干扰引起的差异，强阳的那部分应该是你要的，如果样本都能分开，也不影响结果 ...

好的，感谢老师您的回答，我看这些数据能不能统计。