固定破膜之后降低还是提高离心力

hydwl2019

固定破膜的试剂盒说明书上写固定之后离心力600g，固定前是300g，但是我又看到有人说固定破膜之后降低离心力不容易损伤细胞出现碎片，所以应该怎样？

niwanmao

我们在临床上，固定前后是采用同样的离心力，都是500g

但是考虑到细胞种类不同、固定破膜成份不同，担心条件有影响的话，可以进行实验优化：
- 进行平行对比实验，使用不同的离心力（如300g、450g、600g）处理样本。
通过流式细胞仪观察FSC和SSC图，评估细胞完整性和碎片量。
比较不同条件下目标群体的数量和荧光强度。
- 逐步调整：
从较低的离心力（如300g）开始，逐步增加至能有效沉降细胞但不产生过多碎片的水平。
- 考虑细胞类型：
不同类型的细胞可能对离心力的耐受程度不同。原代细胞通常比细胞系更脆弱。
- 离心时间调整：
如果降低离心力，可以适当延长离心时间，以确保细胞充分沉降。
- 温度考虑：
低温或许可以帮助维持细胞完整性。
- 缓冲液优化：
使用含有适量血清或BSA的缓冲液可以保护细胞，减少机械损伤。
- 处理手法轻柔：
无论选择何种离心力，都要注意轻柔处理样本，避免剧烈震荡或快速吹打。

范晋波

个人建议：按照600g离心，固定后细胞变小，如果离心力变小，虽然可以去除碎片，但是细胞损失可能会增多，尤其是去除上清的时候，而且碎片的去处可以再上机条件设置的时候进行优化，不用在这一步离心考虑这个，意义不大

Yuck

前后一样就行，损失就损失，正常细胞离心还损失呢，除非你是稀缺样本极致追求样本量。