求助外周血中性粒细胞为什么100%表达CD41

cenzhikang

求助，外周血流式，未经任何处理的老鼠外周血，为什么我的中性粒细胞群几乎全部都CD41阳性，我的单染管没有串色，同型对照管也没有阳性，请问这是什么情况

niwanmao

cenzhikang 发表于 2024-9-29 01:16
老师 我仔细看了一下您以前的帖子，好像是我不应该在4度的环境下操作，复温会导致白细胞血小板的聚集 ...

温度应该不是最关键的
我觉得，最主要还是采血后，血小板发生了活化，和白细胞粘连严重，所以很难去除

血小板-白细胞粘连机制：
主要通过活化血小板表面的P-选择素（CD62P）与白细胞表面的PSGL-1相互作用。
小鼠血液比人类血液更容易形成这种粘连，部分原因是小鼠血小板数量较多且更易活化。

避免粘连的策略：
关键在于防止血小板活化和快速、温和地处理样本。

所以需要多方面着手优化，例如：
采集时，直接加入0.5~1％的多聚甲醛固定，避免血小板活化；
或者可考虑试一下Ficoll分离会不会效果好一点；
或者试试肝素抗凝会不会减少这种粘连情况？
采集后尽快处理，手法轻柔这两点最关键。

niwanmao

1、是否经Fc阻断
2、目前用的方案是什么样的？FMO对照位置如何？
3、其它细胞是否同样的强度？如是，则需考虑血小板粘连

cenzhikang

niwanmao 发表于 2024-9-28 16:11
1、是否经Fc阻断
2、目前用的方案是什么样的？FMO对照位置如何？
3、其它细胞是否同样的强度？如是，则需考 ...

您好老师，没有Fc阻断和FMO对照，只是用了同型对照和单染管调节电压，目前就是外周血取血至EDTA抗凝管中，取100 μL抗凝血至管中，加入抗体混合物4度避光孵育30min，加入1 mL 红细胞裂解液 室温裂解至澄清，4度 500g离心5min，弃红色上清，加入100 ul 2%FBS/PBS重悬后上机检测
请问老师该如何避免血小板的粘连呢？是否需要将EDTA抗凝管换成枸橼酸钠

cenzhikang

niwanmao 发表于 2024-9-28 16:11
1、是否经Fc阻断
2、目前用的方案是什么样的？FMO对照位置如何？
3、其它细胞是否同样的强度？如是，则需考 ...

老师 我仔细看了一下您以前的帖子，好像是我不应该在4度的环境下操作，复温会导致白细胞血小板的聚集

cenzhikang

niwanmao 发表于 2024-9-29 07:54
温度应该不是最关键的
我觉得，最主要还是采血后，血小板发生了活化，和白细胞粘连严重，所以很难去除

谢谢老师的指点，我今天全部都试验一下