细胞因子敲除检测

zhangpengFACS

关于某个细胞中细胞因子敲除之后，关于效率的检测大家有什么高见吗？

niwanmao

正常细胞组
敲除组

两组同样进行PMA+离子霉素刺激（假设是用常规的刺激剂可以刺激的话），对比分泌能力？

是不是这个意思呢？

zhangpengFACS

niwanmao 发表于 2024-10-9 20:21
正常细胞组
敲除组

是这么想的，不管胞内流式也好，CBA也好，都想着是先用PMA+离子酶素刺激，分泌能力去比较敲除效率总感觉不对劲，胞内检测要破膜测，是个百分比，问题是圈第一个主细胞团的时候，后面百分比变化很大；CBA是个浓度pg/ml，这样算的话总觉得差点问题。ELISpot的话还不知道可不可以，或者有其他办法？

范晋波

zhangpengFACS 发表于 2024-10-10 16:51
是这么想的，不管胞内流式也好，CBA也好，都想着是先用PMA+离子酶素刺激，分泌能力去比较敲除效率总感觉 ...

不用管胞内胞外，直接做成组织匀浆，检测绝对含量（pg/ml）就行，既然是敲除，肯定是想胞内胞外都没有，又何必分开测呢，你说呢？

zhangpengFACS

范晋波 发表于 2024-10-12 09:32
不用管胞内胞外，直接做成组织匀浆，检测绝对含量（pg/ml）就行，既然是敲除，肯定是想胞内胞外都没有， ...

用什么方法去测整体的呢

范晋波

zhangpengFACS 发表于 2024-10-15 09:25
用什么方法去测整体的呢

流式可以测蛋白的产品很多，CBA  aimplex  瑞思凯尔  赛基 中生的  都可以，自己选择就行

司徒随风

ELISpot的话，可以用敲除组与未敲除组与刺激剂在ELISpot板中孵育，再加荧光染料，可以看到不同组能产生相应细胞因子的细胞个数（斑点数）。