CD3分群问题

1141231682

请问一下，这个CD3算做有明显分群吗，红色的是同型对照。

wxd

如果样品是PBMC或者外周血的话，这个算分群不明显。
正常情况下，CD3是个阴性和阳性群都很明显的指标，理论上峰图中应该有两个峰。当然如果样品中如果T细胞的比例很高，也会导致CD3的阴性峰不明显。建议楼主查一下所检测样品中正常情况下T细胞的比例。
这个结果，也可能是CD3抗体用量不足或者样品处理（如胰酶消化等）导致的阴性和阳性没有完全分离。建议做抗体滴定实验或者优化实验条件。

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wxd 发表于 2024-10-9 16:57
如果样品是PBMC或者外周血的话，这个算分群不明显。
正常情况下，CD3是个阴性和阳性群都很明显的指标，理论 ...

不是PBMC，是分离PBMC经过培养后的细胞，我做了另一个组别的有比较明显的分群，这种情况是不是样品本身的问题，想问下胰酶消化是会影响到细胞的分群吗?

1141231682

wxd 发表于 2024-10-9 16:57
如果样品是PBMC或者外周血的话，这个算分群不明显。
正常情况下，CD3是个阴性和阳性群都很明显的指标，理论 ...

这是另一组别的

niwanmao

1141231682 发表于 2024-10-9 17:04
这是另一组别的

培养过可能会发生CD3下调，只要在正常全血样本中，出现明显的分群就可以（通常阳性群和阴性群之间有一个数量级的空白区域）

wxd

1141231682 发表于 2024-10-9 17:03
不是PBMC，是分离PBMC经过培养后的细胞，我做了另一个组别的有比较明显的分群，这种情况是不是样品本身的 ...

从原理上来说，胰酶消化不会影响细胞群本身比例的变化。但是不合适的消化时间会导致细胞表面抗原被消化，导致抗体染色异常，影响检测结果。

1141231682

wxd 发表于 2024-10-10 08:38
从原理上来说，胰酶消化不会影响细胞群本身比例的变化。但是不合适的消化时间会导致细胞表面抗原被消化， ...

但是我们好像没有胰酶消化处理，直接培养后就取样检测了

1141231682

niwanmao 发表于 2024-10-9 20:18
培养过可能会发生CD3下调，只要在正常全血样本中，出现明显的分群就可以（通常阳性群和阴性群之间有一个 ...

但是我们想知道培养过来CD3的表达率，我们的CD8是有明显的分群的

niwanmao

1141231682 发表于 2024-10-10 14:11
但是我们想知道培养过来CD3的表达率，我们的CD8是有明显的分群的

可以将FCS文件压缩一下传上来，站友们可帮你看看分群，通常我们更习惯用双参数散点图观察

1141231682

niwanmao 发表于 2024-10-10 14:32
可以将FCS文件压缩一下传上来，站友们可帮你看看分群，通常我们更习惯用双参数散点图观察 ...

老师，您帮忙看看