thermo磁珠分选

huxin

有哪位大佬做过呀，我打算做CD8阴选后，进行流式分析，有哪位有好的protocol或者注事项。

组织样本和PBMC样本。

之前也有向厂家请教过，给了三个链接，一个说明书，一个学习链接，一个产品链接
8804-6812.pdf (thermofisher.cn)

https://www.thermofisher.cn/cn/z ... l-samplepreparation
MagniSort™ Human CD8 T cell Enrichment Kit (thermofisher.cn)


还有一点，PBMC要进行预处理，否则，不然细胞数量和磁珠用量不匹配。这个应该咋理解

niwanmao

1. 样本准备:
   - 对于组织样本:需要先进行组织消化,获得单细胞悬液。具体消化配方，需根据组织不同选用不同的配方，可参考文献，也可从最完整的实体组织酶消化指导手册上找找看 （https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5834-1-1.html）
   - 对于PBMC样本:对全血密度梯度离心分离出获得。

2. CD8阴性选择:
   - 使用磁珠分选试剂盒进行,如这里的MagniSort，也可以考虑Dynabeads或MACS系统。
   - 严格按照试剂盒说明书操作,包括细胞数量、缓冲液和磁珠用量等。

3. 流式分析注意事项:
   - 使用适当的抗体组合,识别目标细胞群。
   - 包括活/死细胞染色,以排除死细胞。
   - 设置合适的补偿和设门。

4. PBMC所谓的预处理，其实是调节细胞浓度:
   - PBMC样本中细胞浓度可能较高,需要先计数并调整浓度。
   - 按照试剂盒推荐的细胞数:磁珠比例进行操作。
   - 如果细胞数过多,可能导致磁珠不足,影响分选效率。

5. 一般注意事项:
   - 保持样本在冰上或4°C操作,以维持细胞活力。
   - 使用无菌技术,避免污染。
   - 优化每一步骤,以最大化细胞收率和纯度。

huxin

谢谢倪老师，跟着您学了不少