有关该文中CFSE检测细胞增殖的问题到底是学术争论还是错误数据，请各位老师评判

kameow

CFSE染料用作细胞增值检测，一直都是依靠荧光衰减作为细胞增殖依据的。附件的文章和数据处理截图请各位老师帮我评判下，这到底是错误数据还是CFSE新技术？还望各位老师不吝赐教。

一席繁荒

o ng/ml的IL-35下怎么还有增殖呢，按理说没有抗原刺激的情况下T细胞是不会增殖的，或者说5天内没有抗原存在不会增殖这么明显的。这篇文章的数据合理性容易被质疑。

niwanmao

确实邪门，看PDF里面这幅图左侧的柱状图，纵坐标写的是CD4+T cell viability，感觉是作者把CFSE染色当成活性染料，染上的算活的增殖细胞，没染上的算死细胞或没增殖的细胞，结果0孔活细胞25.92％，1ng/ml孔23.4％，10ng/ml 19.05％，就推断出IL35抑制CD4+T细胞增殖

从作者这个论断来看，对CFSE的染色应该是没理解，整个染色也应该没染上（文中没提到CFSE染色终浓度）。这份杂志4.7分，医学Q2，很可能Reviewer是临床的，不看方法学，只看结果数据

kameow

niwanmao 发表于 2024-10-17 09:21
确实邪门，看PDF里面这幅图左侧的柱状图，纵坐标写的是CD4+T cell viability，感觉是作者把CFSE染色当成活 ...

谢谢老师回复。

kameow

niwanmao 发表于 2024-10-17 09:21
确实邪门，看PDF里面这幅图左侧的柱状图，纵坐标写的是CD4+T cell viability，感觉是作者把CFSE染色当成活 ...

1．用纯水10倍 稀释CFSE 细胞标记液。
2．根据需要检测的细胞样品数，用细胞标记液将CFSE 母液100-500倍 稀释，再用PBS2-8倍 稀释，配制成染色工作液，终浓度相当于将CFSE 母液200-4000倍 稀释。不同的细胞需要根据预实验结果确定最佳染色浓度。如果荧光强度弱，可以适当提高CFSE的终浓度。如果背景太高，可以适当降低CFSE的终浓度，请摸索条件找到最佳浓度。
3．将待测细胞用染色工作液重悬，至细胞浓度大约107/ml。
4．在37℃培养箱中孵育15-30分钟。
5．离心后去上清，收集细胞，用PBS或无血清培养基洗涤细胞1-2次，最后加入PBS或无血清培养基重悬细胞。
6．取500μl细胞悬液，用流式细胞仪或荧光显微镜检测。
7．随后还可按照细胞的正常培养方法进行培养。可以在荧光显微镜下直接观察标记效果，也可以在培养适当时间后再用流式细胞仪检测细胞增殖，或用于其他特定实验目的的细胞荧光示踪。标记的细胞也可以用于活体动物的移植，并用荧光进行示踪。标记的细胞呈绿色荧光。
以上是该文数据使用的CSFE试剂盒的操作步骤，我感觉是对方误以为CFSE染色定主群位置的操作就是最后的检测结果了，没考虑步骤7，也没问懂的人。只要染料是CFSE检测增殖，不用荧光衰减法检测基本上就是属于不懂硬编。何况看这个效果，CFSE染色时应该没几个活细胞了。