请问MFI应该在哪一个门下计算？

元宝

做了一次抗体滴定，计算阳性细胞群和阴性细胞群的MFI，疑惑的一点是我该从single门统计还是对应的通道门统计？一时间想不明白了，还请解惑。

zhangpengFACS

其实无论从阳性/阴性群体还是从single cell里看MFI都有不同的意义，也应用于不同的场景。抗体滴定的话需要用阴阳性各自的MFI进行计算染色指数（SI）：SI=（阳性MFI-阴性MFI）/2×rSD（阴性）。

元宝

zhangpengFACS 发表于 2024-10-24 14:23
其实无论从阳性/阴性群体还是从single cell里看MFI都有不同的意义，也应用于不同的场景。抗体滴定的话需要 ...

我从各自的阴性阳性群里算了MFIzhihou ，用这个公式计算，显示的曲线很奇怪，不知道是数据处理的问题还是实验操作的问题

zhangpengFACS

元宝 发表于 2024-10-24 14:54
我从各自的阴性阳性群里算了MFIzhihou ，用这个公式计算，显示的曲线很奇怪，不知道是数据处理的问题还是 ...

锁定好染色的细胞数和染色体系，大致看了一下曲线，除了CD3、PD-1抗体都还比较正常的，染色比例越高，SI越高。
PD1的原因可能是细胞选材的问题，阳性并不是很阳，

元宝

zhangpengFACS 发表于 2024-10-24 14:58
锁定好染色的细胞数和染色体系，大致看了一下曲线，除了CD3、PD-1抗体都还比较正常的，染色比例越高，SI ...

用的C57小鼠脾脏细胞，从CD3+群中圈的PD-1，没有另外加刺激。这种情况的话，怎么判断该选哪一种稀释比例使用抗体呢？

zhangpengFACS

元宝 发表于 2024-10-24 15:03
用的C57小鼠脾脏细胞，从CD3+群中圈的PD-1，没有另外加刺激。这种情况的话，怎么判断该选哪一种稀释比例 ...

锁定好染色的细胞数后，根据抗体说明书向下做梯度稀释

元宝

zhangpengFACS 发表于 2024-10-24 16:48
锁定好染色的细胞数后，根据抗体说明书向下做梯度稀释

染色细胞数统一都是1*10^6，体系100微升，说明书并没有给出推荐用量，所以按照说明书上的浓度梯度稀释选取了1:16~1:512设计的这次实验，就是现在的结果。

niwanmao

元宝 发表于 2024-10-24 14:54
我从各自的阴性阳性群里算了MFIzhihou ，用这个公式计算，显示的曲线很奇怪，不知道是数据处理的问题还是 ...

@zhangpengFACS  站友说的很对，关注一下设门的阳性群体是否纯粹，如果不纯粹，就很容易MFI受影响计算不准，最后曲线也就没有规律了

PD-1要圈阳性不容易，尤其是分群不清的时候，阴性群可用Naive T，阳性群尽量在Memory里面选出一个明确的峰