胞内染色阻断剂使用

ofbruce123

目前用的是 BD GolgiPlug™这款阻断剂胞内染色，之前阻断实验都是比较标准的4-6h，这次阻断了8h后胞内的表达指标反而都升高很多，实验的表型是重复很多次的应该问题不大。


目前结果来看8h相对于4-6h细胞死亡率并没有明显升高，但是表达情况明显更高。有没有大佬有类似的情况呢？




以及我之前一直是将这个阻断剂按照 1：1000稀释后，每个流式管2×106加200ul置于37℃孵育，并没有严格按照protocol上的2ul/1ml/106个细胞这样的比例，会不会对我后续的表达也有影响呢？

niwanmao

1. 核心问题分析:
- Brefeldin A (GolgiPlug™)阻断时间延长导致细胞因子表达升高
- 剂量使用与标准protocol存在差异

2. 阻断时间影响分析:
- 标准4-6h vs 8h现象
  * 细胞活性未受明显影响
  * 细胞因子表达显著升高


3. 建议措施:
- 阻断时间: 单次结果较难确认可重复性
  * 建议做时间梯度(2h/4h/6h/8h)对照实验
  * 同时检测细胞活性和凋亡情况
  * 验证结果重复性

- 浓度调整:
  * 按protocol标准调整浓度
  * 做浓度梯度实验验证最佳条件
  * 统一实验条件确保结果可比性

4. 补充建议:
- 加入阴性对照组(无阻断剂)
- 必要时考虑使用不同的protein transport inhibitor(如Monensin)进行验证
- 详细记录细胞状态和实验条件,以便追溯原因

ofbruce123

niwanmao 发表于 2024-11-4 09:50
1. 核心问题分析:
- Brefeldin A (GolgiPlug™)阻断时间延长导致细胞因子表达升高
- 剂量使用与标准protoco ...

谢谢老师，但是感觉AI味好足哈哈哈

niwanmao

ofbruce123 发表于 2024-11-4 10:42
谢谢老师，但是感觉AI味好足哈哈哈

不要加分给我，加给后面回复更有内涵的站友，


确实是利用了Claude的思考功能，但是看了下感觉还是蛮靠谱的，所以就转给你了

我个人的建议还是类似的，一是阴性内参做一下，二是梯度和重复实验做一下，确保结果是真实的