混染样本调节补偿

wmj123456

目前做的是3色实验，分别为FITC，PE，PerCP，由于每次都做单染管觉得比较麻烦，想在混染管中直接调节补偿。通常在混染中调节补偿，我是看细胞觉得横平竖直了，就觉得补偿是可以的了，
但是目前遇到个问题，FITC的阳性比例较少，不知道怎么调节FITC对PE通道的溢漏？各位老师有哪些好的经验？

niwanmao

通常仪器稳定性好的话，补偿做好至少一段时间内是稳定的，不需要天天或者每次做

FITC-PE大多数1％不到
PE-FITC大多数在20-30%

wmj123456

niwanmao 发表于 2024-12-10 07:57
通常仪器稳定性好的话，补偿做好至少一段时间内是稳定的，不需要天天或者每次做

FITC-PE大多数1％不到

倪老师，实验中还有一个问题，是不同批次样本，样本荧光强度有差异，导致补偿系数会有差异。

PE-FITC在这个电压条件下，补偿系数是15左右。那也就是说，我可以多做几个不同批次的样本带上单染管，看看补偿系数是否都是在15左右？如果是，后续我就可以都调在15了。

而且感觉补偿在20以内，对PE阳性和FITC阳性百分比变化不大

niwanmao

wmj123456 发表于 2024-12-10 13:51
倪老师，实验中还有一个问题，是不同批次样本，样本荧光强度有差异，导致补偿系数会有差异。

PE-FITC在 ...

荧光强度不会影响补偿值，如果影响了，说明原来就没有调整到位