流式抗体该怎么使用？

元宝

我目前了解到三种流式抗体使用方式

1、滴定以后按照效价，例如1/128，每次使用前用FACS溶液把抗体按照1/128稀释，每个样品加入10微升稀释液。
2、滴定，按照效价使用，控制每个样品抗体体积30微升，每个抗体按照比例加入，少的用PBA补齐。
3、不滴定，所有抗体按照1/200使用，例如控制每个样品抗体体积一共40微升，每个抗体取0.2微升，少的用PBS补齐。

方法1是我之前的课题组一直以来的用法，染色效果没有明显问题，方法3是目前课题组的用法，但是他们觉得方法1很浪费抗体，我也不理解方法3的合理性在哪里，方法2是听说的另外一个课题组的用法。

请问各位哪一种更为合理和适用？

niwanmao

通常滴定的体积100ul比较常见

用100ul滴定抗体用量之后，明确多少ul使得信噪比最高，后面就用多少ul

元宝

niwanmao 发表于 2024-12-18 14:57
通常滴定的体积100ul比较常见

用100ul滴定抗体用量之后，明确多少ul使得信噪比最高，后面就用多少ul

老师，您的意思是抗体和稀释液总体积100微升，通过加入抗体质量不同形成不同的稀释比例，最后滴定确定加入多少的抗体染色效果最佳吗?

niwanmao

元宝 发表于 2024-12-24 12:41
老师，您的意思是抗体和稀释液总体积100微升，通过加入抗体质量不同形成不同的稀释比例，最后滴定确定加 ...

滴定步骤参见既往的帖子：
（1）抗体滴定的流式检测 Antibody Titration by Flow Cytometry
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-11272-1-1.html
(出处: 流式中文网)

（2）总说滴定，你滴一个给我看看
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5746-1-1.html
(出处: 流式中文网)

元宝

niwanmao 发表于 2024-12-24 15:44
滴定步骤参见既往的帖子：
（1）抗体滴定的流式检测 Antibody Titration by Flow Cytometry
https://www. ...

好嘞，谢谢倪老师！

沃兹姬

niwanmao 发表于 2024-12-24 15:44
滴定步骤参见既往的帖子：
（1）抗体滴定的流式检测 Antibody Titration by Flow Cytometry
https://www. ...

倪老师，关于抗体滴定我想请教一下，低浓度要和高浓度一个电压吗，我用低浓度但是调高电压也能分群，那我后面可以就用这个电压和这个浓度吗

niwanmao

沃兹姬 发表于 2025-1-24 10:54
倪老师，关于抗体滴定我想请教一下，低浓度要和高浓度一个电压吗，我用低浓度但是调高电压也能分群，那我 ...

电压必须一致

电压优化，站内有对应的帖子指导：ISAC Cyto2016年会记录5：教你调电压
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5235-1-1.html
(出处: 流式中文网)

沃兹姬

niwanmao 发表于 2025-1-24 11:16
电压必须一致

电压优化，站内有对应的帖子指导：ISAC Cyto2016年会记录5：教你调电压

明白了倪老师，但是考虑到经费问题，可以不考虑最优用量嘛，只要能分群就好？

niwanmao

沃兹姬 发表于 2025-1-25 11:05
明白了倪老师，但是考虑到经费问题，可以不考虑最优用量嘛，只要能分群就好？ ...

优化电压，用不到抗体
抗体滴定如果注意用稀释法，那么所用的抗体最多就2-3人份，反而可能使你节省大量抗体。
反之，你认为的节省，反而会是浪费，或者是实验数据的不理想

落叶风吹

沃兹姬 发表于 2025-1-25 11:05
明白了倪老师，但是考虑到经费问题，可以不考虑最优用量嘛，只要能分群就好？ ...

我记得贝克曼应该有不需要稀释的试剂，你可以问问