PBMC染CD14+单核细胞很少，有时候几乎没有

dangdang-

图分别对应总细胞、单细胞、活细胞、CD14染色，但是不知道为啥CD14+单核细胞总是很少，细胞是人血液提的PBMC冻存后染色的，但是之前用的新鲜PBMC也染不出来，不知道什么原因，求大神解答，图中的圈门也不知道是否合理，请大神不吝赐教。

niwanmao

抗体有无确认过性能？

dangdang-

niwanmao 发表于 2024-12-19 14:35
抗体有无确认过性能？

没有，买的是BD的555398，想着应该没问题，但就是不太染的出来

niwanmao

dangdang- 发表于 2024-12-19 14:55
没有，买的是BD的555398，想着应该没问题，但就是不太染的出来

大公司品控一般不会有大问题

7-AAD+那部分细胞中，有无阳性信号？

dangdang-

niwanmao 发表于 2024-12-19 15:17
大公司品控一般不会有大问题

7-AAD+那部分细胞中，有无阳性信号？

老师，您是说死的那部分细胞吗，您看看，好像是有，我的单核都死了吗

niwanmao

dangdang- 发表于 2024-12-19 16:04
老师，您是说死的那部分细胞吗，您看看，好像是有，我的单核都死了吗

冻存过，可能会有损失，你试一下新鲜全血看看

dangdang-

niwanmao 发表于 2024-12-19 16:46
冻存过，可能会有损失，你试一下新鲜全血看看

好的，谢谢老师，我下次试试新鲜的全血。

巴巴布莱特

PBMC冻存后会丢失很多细胞，主要就能留下T细胞和一部分B细胞，NK、单核啥的就很难检测到了。我看了一下，解冻后的PBMC基本就只剩下CD14+/CD16-的单核了大约14%（CD11b+门内）也很难分辨其实，但是新鲜刚分离完的PBMC是能检测到的，大概能到20%。你要想找单核细胞不行就多色排除掉其他细胞。如果只想看CD14的话最好用新鲜PBMC再做一次吧。