Balb/c小鼠外周血T细胞和B细胞比例问题

YQM

老师好，我想咨询一下小鼠外周血圈门过程中遇到的①淋巴细胞是不是圈错了，只有1%左右②T细胞和B细胞比例各占CD45的70%和15%，与文献中B细胞＞50%，T细胞20%左右相差较大，是不是因为我染色没有染好

以下是我的操作：
100ul眼眶取血后加入生工红细胞裂解液3ml，冰上裂红20min，0.3g离心5min弃上清，加入2mlPBS洗一遍（同转速）弃上清，余下液体作为染色体系（约100ul）4℃染色30min；再用1mlPBS洗一遍后上机
染色抗体：CD45：APC-cy7，CD3：percp-cy5.5，CD19：PE，每种抗体各加0.5ul；死活为Dapi

niwanmao

不清楚每个通道对应的标记名称，建议图上标注

YQM

niwanmao 发表于 2024-12-24 15:46
不清楚每个通道对应的标记名称，建议图上标注

谢谢老师，已标注

niwanmao

这里的淋巴细胞占1.5％，是占所有信号，而所有信号中，从密度可见左侧存在大量的碎片，这些碎片比例估计在80％以上，所以你把左侧碎片排除掉，实际上淋巴细胞应该会接近10％

至于T和B的比例，这里看上去分群是很好的，比例应该没错，是否跟你的小鼠模型和文献不同有关？

YQM

C:\Users\YQM\Desktop
经过与Cytek仪器工程师讨论发现我CD3选错通道了，应该是B9选成了B2，纠正以后确实几个样本B细胞比例正常了一些（例如样本一），但是老师我存在疑问，一共做了8只鼠，发现他们一开始的圈门差异很大，好像是粒细胞和单核细胞样本二很少，B细胞比例也低了不少，不知道是我处理问题还是说样本差异就是这么大。

niwanmao

YQM 发表于 2024-12-24 21:19
经过与Cytek仪器工程师讨论发现我CD3选错通道了，应该是B9选成了B2，纠正以后确实几个样本B细胞比例正常了 ...

8只小鼠，几只一致性高，几只偏差大？

YQM

niwanmao 发表于 2024-12-25 07:41
8只小鼠，几只一致性高，几只偏差大？

老师您好，这是我们8只小鼠的圈门，大概各占一半的样子

niwanmao

YQM 发表于 2024-12-25 09:07
老师您好，这是我们8只小鼠的圈门，大概各占一半的样子

如能确认操作是稳定的，那么只能归因于小鼠本身存在差异？

例如这篇文章https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC2268915/ 里面提到，随着小鼠年龄增长，B细胞比例会增高很明显从20％到50％

YQM

niwanmao 发表于 2024-12-25 11:23
如能确认操作是稳定的，那么只能归因于小鼠本身存在差异？

例如这篇文章https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/ ...

好的，谢谢老师