流式细胞术在变态反应诊断中的应用:嗜碱性粒细胞和肥大细胞活化试验的最新进展

niwanmao

变态反应性疾病,特别是IgE介导的过敏反应,已成为一个重要的公共卫生问题。准确诊断对于患者管理至关重要。目前的诊断流程主要依赖病史收集、皮肤试验和特异性IgE(sIgE)定量检测。然而,这些传统方法都存在一定局限性,有时需要通过激发试验来确诊。但激发试验可能诱发严重反应,在某些情况下甚至是禁忌症。

随着CD63作为脱颗粒标志物的发现,基于流式细胞术的检测方法应运而生,包括嗜碱性粒细胞活化试验(BAT)和被动肥大细胞活化试验(pMAT)。这些方法为体外诊断IgE介导的过敏反应提供了新的选择。

Ebo DG等人在2024年11月23日J Allergy Clin Immunol.杂志上重点介绍BAT和pMAT的基本原理、最新应用进展及其优缺点。


流式细胞术检测细胞活化的基本原理

所有基于流式细胞术的细胞活化检测都是通过剂量依赖方式测试受试者对特定过敏原的反应性。检测可以通过直接和/或被动方式进行:

1、直接检测(如常规BAT):
- 需要过敏患者的全血样本
- 包含循环抗体(IgE、IgG1等)和效应细胞
- 效应细胞已经对过敏原活化做好准备

2、被动检测(如pMAT):
- 仅需要过敏患者的血清/血浆
- 用于致敏从其他来源获得的效应细胞

检测流程:
1. 细胞致敏后,暴露于设定浓度的过敏原以建立剂量-反应曲线
2. 通过流式细胞术测量细胞表面活化标志物(如CD63、CD203c或CD107a)的上调程度
3. 与未刺激的对照细胞比较

不同类型的检测方法

1、常规BAT:
- 使用患者新鲜全血
- 需要在采集后4-24小时内分析
- 约10-15%受试者为非应答者

2、被动BAT(pBAT):
- 去除供体嗜碱性粒细胞上的IgE
- 用患者血清进行被动致敏
- 结果依赖于供体细胞的应答状态

3、条形码被动BAT(PCBAT):
- 使用CD34+造血祖细胞分化的嗜碱性粒细胞
- 可克服非应答者问题
- 技术要求高,耗时较长

4、肥大细胞活化试验(MAT):
- 可使用多种肥大细胞来源:

• Hoxb8条件性永生化肥大细胞
• 人源肥大细胞系(如LAD2)
• 培养的原代人肥大细胞
  

- 同时表达IgE和非IgE受体



在不同过敏性疾病中的应用效果

1、呼吸道过敏:
- BAT能有效区分尘螨、花粉过敏患者
- 可用于监测免疫治疗效果
- pMAT对HDM、猫、桦树和草花粉过敏的诊断显示良好效果

2、食物过敏:
- BAT在花生和芝麻过敏诊断中准确性最高
- 可用于监测口服和舌下免疫治疗
- hMC-pMAT在区分花生过敏、非过敏和临床耐受者方面表现优异

3、药物过敏:
- BAT在神经肌肉阻滞剂过敏诊断中表现良好
- 对β-内酰胺类抗生素过敏的诊断价值有限
- hMC-pMAT在氯己定和罗库溴铵过敏诊断中可作为BAT的替代方法

4、自身免疫性荨麻疹:
- CSU-BAT可识别69%的自身免疫性慢性自发性荨麻疹
- 可用于监测疾病活动度和治疗反应

优势与局限性对比

表1. 不同肥大细胞来源的特点比较


参考文献：Ebo DG, Bahri R, Eggel A, Sabato V, Tontini C, Elst J. Flow cytometry-based basophil and mast cell activation tests in allergology: State of the art. J Allergy Clin Immunol. Published online November 23, 2024. doi:10.1016/j.jaci.2024.11.023IF: 11.4 Q1