细菌染料问题

Veblen

老师好，最近在看细菌检测时所用的染料有cFDA(全称见图片), 请问一下这个染料是染所有细胞还是活细胞？

另还有一个DiOC2,这个染料是染所有的细胞吗？
查了些资料，始终没弄明白，谢谢老师。

niwanmao

CFDA (5(6)-羧基荧光素二乙酸酯)是一种主要用于检测活体细菌的荧光染料，原理是透过细胞膜，在活细胞内被胞内酯酶水解，生成荧光产物，从而实现对活细胞的标记。由于死亡细胞缺乏将染料转化为荧光形式所需的酶活性，因此CFDA不会染色死亡细胞。相反，死亡细胞可以通过其他染料进行识别，例如确认膜完整性受损细胞的PI等。

DiOC2(3) (3,3'-二乙基氧杂菁碘化物)通常用于评估线粒体膜电位，但也可以染色所有细胞，而不受细胞死活状态的影响，所以对于区分活细胞和死细胞很难。只能说在一定程度上可能能够提示线粒体膜电位状态。

对于需要同时染色活菌和死菌的应用，通常会将CFDA与其他染料(如碘化丙啶，PI)联合使用。

进一步阅读：
[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23184595/
[2] https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/mp34150.pdf
[3] https://www.interchim.fr/ft/B/BE8261.pdf
[4] https://academic.oup.com/jambio/ ... 7612253?login=false
[5] https://www.aatbio.com/products/ ... carbocyanine-iodide
[6] https://www.researchgate.net/pub ... t_of_Cell_Viability
[7] https://www.dojindo.com/products/BS10/
[8] https://www.interchim.fr/ft/4/46764A.pdf
[9] https://biotium.com/product/dioc ... arbocyanine-iodide/

Veblen

niwanmao 发表于 2024-12-26 08:21
CFDA (5(6)-羧基荧光素二乙酸酯)是一种主要用于检测活体细菌的荧光染料，原理是透过细胞膜，在活细胞内被胞 ...

还了解一种染料CYTO9， 可以对死和活细胞染色；
这里就有一个问题：为什么在肿瘤细胞杀伤的时候，肿瘤细胞标记用的CFSE，为什么不用Cyto9标记呢？
另，既然这些可以染细菌，是因为细菌的细胞壁、细胞膜都有缝隙，所以这些染料可以进入胞内？
Thanks~

niwanmao

Veblen 发表于 2024-12-26 21:56
还了解一种染料CYTO9， 可以对死和活细胞染色；
这里就有一个问题：为什么在肿瘤细胞杀伤的时候，肿瘤细 ...

CFSE的主要用途是追踪细胞分裂代数。 每次细胞分裂时，CFSE的荧光强度会减半，因此可以通过流式细胞术分析不同荧光强度的细胞群体，从而追踪细胞的分裂代数和增殖情况。这对于评估药物作用于肿瘤细胞的动态效果更全面。

Cyto9主要和PI一起使用区分死活，属于一次性评估。

至于这些染料进入细菌内的原理，细胞壁和细胞膜确实存在一定的通透性，但这并非是CFSE和Cyto9等染料能够进入细菌细胞的唯一原因。更重要的是这些染料本身的特性，基本上都是小分子、脂溶性的， 可以相对容易地穿过细胞膜。如钙黄绿素-AM等染料上的AM酯基团也可以帮助其进入细胞。

Veblen

niwanmao 发表于 2024-12-27 07:54
CFSE的主要用途是追踪细胞分裂代数。 每次细胞分裂时，CFSE的荧光强度会减半，因此可以通过流式细胞术分 ...

got it，thanks.
感谢老师。