如何用FMO样品管圈门

yuqzhuo@163.com

如图，EAE小鼠的脾脏样品，蓝色是GATA3的FMO,红色是样品管。但是FMO纵轴GATA3指标上有许多散在的点，
这个圈门是图111里这种做到FMO显示为0,
还是图222这种紧压在蓝色主群的上缘？




还有Rorgt的FMO,图3 样品管的阴性群，比FMO主群偏上，但有分群，这种是按样品分群来圈吗？为什么阴性群位置跟FMO差那么多？

niwanmao

当一个抗原表达分析的时候，主要干扰因素是邻近通道荧光渗漏时，FMO可以直接拿来做设门参照。

但如果一个抗原表达分群良好且存在更明显的非特异性结合（非荧光渗漏因素）时，以分群为准

yuqzhuo@163.com

niwanmao 发表于 2025-1-4 21:00
当一个抗原表达分析的时候，主要干扰因素是邻近通道荧光渗漏时，FMO可以直接拿来做设门参照。

但如果一个 ...

但是，您看我FMO的样品，它似乎也不是压得很实的一群，是一个群旁边还有一些散在的细胞

yuqzhuo@163.com

yuqzhuo@163.com 发表于 2025-1-6 09:03
但是，您看我FMO的样品，它似乎也不是压得很实的一群，是一个群旁边还有一些散在的细胞 ...

就是这种散在的细胞，我需要把它归在阴性的里面吗？

niwanmao

yuqzhuo@163.com 发表于 2025-1-6 09:05
就是这种散在的细胞，我需要把它归在阴性的里面吗？

分群不清时，且荧光渗漏已用FMO排除影响，此时的背景，主要归因于抗体的非特异性结合，此时两个解决方案：
1、找明确阴性的生物学参照（相同种属，且明确不表达该标记的）
2、退而求其次，找与抗体想匹配的同型对照，但可能会比较难