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磁珠分选的效果优于流式分选吗?

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发表于 昨天 22:02 | 显示全部楼层 |阅读模式

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浆细胞肿瘤(PCN)的预后因遗传异常不同而异。因为骨髓穿刺样本中细胞群体的异质性,包括浆细胞比例低和样本稀释,所以要灵敏地检测出遗传突变有难度。因此,从骨髓样本中纯化浆细胞对于提高分析灵敏度很重要

Yu Jeong Choi等人对流式分选(FACS)和磁珠分选(MACS)两种细胞分选技术进行比较分析,以评估MACS是否可以替代FACS用于临床应用。

样本和方法
样本来源:研究纳入31例疑似PCN的患者,骨髓穿刺样本分为两部分,分别用于FACS和MACS分选。

细胞分选方法:
- FACS:使用ProFlow Cell Filter和S3e™细胞分选仪,通过CD38和CD138标记分选浆细胞。
- MACS:使用EasySep™缓冲液、RBC裂解缓冲液、抗CD138抗体和RapidSpheres™微球,在磁场中分选细胞。

细胞纯度评估:
- 显微镜检查:对7例患者的FACS和MACS分选产物进行Wright-Giemsa染色,计算浆细胞比例。
- 流式细胞术:使用S3e™细胞分选仪评估FACS和MACS分选产物中CD38+CD138+细胞的比例。
- FISH检测:使用FACS和MACS分选的细胞进行FISH检测,检测10个样本中的细胞遗传学异常。
- NGS检测:从分选产物中提取基因组DNA,使用定制捕获panel(针对112个与淋巴瘤相关的基因)进行测序。

研究结果
1、患者特征
- 中位年龄:71岁(IQR 58-75)。
- 性别比例:男性20例(64.5%)。
- 诊断分布:19例(61.3%)为多发性骨髓瘤(MM),7例(22.6%)为意义未定的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)。
- 骨髓浆细胞比例:中位值为16.0%(IQR 7.6-39.4)。

2、浆细胞纯度比较
- 显微镜检查:MACS分选的样本中浆细胞比例高于FACS分选样本(中位数差异为7%,p=0.0156)。
- 流式细胞术评估:MACS分选的样本中浆细胞比例高于FACS分选样本(中位数差异为12.35%,p=0.0313)。

3、FISH检测结果
- 样本数量:10个样本同时使用FACS和MACS进行FISH检测。
- 异常细胞比例:MACS分选样本中异常细胞比例高于FACS分选样本(中位数差异为11.05%,p=0.001)。

4、NGS检测结果
- 样本数量:24个样本进行NGS分析。
- 检测到的变异:共检测到77个1/2级变异,包括49个单核苷酸变异(SNVs)、9个小插入/缺失(indels)和19个拷贝数变异(CNVs)。
- CNVs检测:10个CNVs在两种分选方法中均被检测到;8个CNVs仅在MACS分选样本中检测到;1个CNV仅在FACS分选样本中检测到。

VAF比较:
- DTA基因组(DNMT3A、TET2、ASXL1):MACS分选样本的VAF低于FACS分选样本(差异中位数为-0.006555,p=0.0020)。
- 非DTA基因组:MACS分选样本的VAF高于FACS分选样本(差异中位数为0.002805,p=0.0019)。


可见:
- MACS在浆细胞分选中表现出与FACS相当甚至略优的效果,尤其是在浆细胞纯度和异常细胞比例方面。
- MACS分选样本中检测到的CNVs更多,表明其在检测基因组改变方面具有更高的灵敏度。
- DTA基因组的VAF在FACS分选样本中更高,可能与克隆性造血相关。

但是,仅凭这点,无法说明MACS就比FACS好,因为该研究存在以下局限性:
- 仅纳入了31例患者,这限制了研究结果的统计功效和普遍性
- 单中心研究,可能受到特定人群或实验室条件的影响
- 未使用如ASCAT等生物信息学工具来评估肿瘤纯度,这可能影响了对细胞纯度的准确评估。
- 未确认DTA基因突变是否为克隆性造血突变
- 并非所有样本都进行了浆细胞纯度评估、FISH或NGS分析,这可能导致结果的不完整性


因此,流式分选仍是金标准,这篇文章的证据仅仅只是说明:MACS是PCN患者骨髓样本中浆细胞分选的可行替代方法,尤其在缺乏FACS设备或需要快速处理的临床环境中

参考文献:Choi YJ, Choi J, Kang Y, Shin S, Lee ST, Choi JR. Evaluation of plasma cell sorting methods in multiple myeloma patients: flow cytometry versus magnetic beads. Cancer Cell Int. 2025;25(1):16. Published 2025 Jan 17. doi:10.1186/s12935-025-03647-8
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