同种荧光素偶联的不同抗体，阴阳界限不同该如何解释

土土虎

求解释：

相同的细胞样本，相同的荧光素偶联，用CD45-ef450单染后阴阳界限在10^4左右，而用CD3-ef450单染后阴阳界限在10^3左右。两者采集电压相同。
请问如何解释？谢谢！

niwanmao

阳性群体和阴性群体距离分别怎么样？
有图传上来最好

土土虎

如图所示，样本相同，荧光素相同，采集电压相同，只是抗原不同。一个界限在10^3左右，一个界限在10^4左右

土土虎

niwanmao 发表于 2025-1-22 14:40
阳性群体和阴性群体距离分别怎么样？
有图传上来最好

已上传，谢谢！

niwanmao

土土虎 发表于 2025-1-22 17:02
如图所示，样本相同，荧光素相同，采集电压相同，只是抗原不同。一个界限在10^3左右，一个界限在10^4左右 ...

我不知道你分别用什么细胞作为阴性群？
CD45阴性群体正常不会存在这么多，正常白细胞CD45全阳性，只有一些有核红细胞是CD45-，而那些细胞通常非常少，所以这个峰形分布就有问题

其次你只看某抗体荧光强度是不对的，抗体的荧光强度不是荧光素决定，而是细胞表面的分子数量，还跟细胞的本底荧光，这两者相加，决定了阳性峰最后的位置

土土虎

niwanmao 发表于 2025-1-22 19:10
我不知道你分别用什么细胞作为阴性群？
CD45阴性群体正常不会存在这么多，正常白细胞CD45全阳性，只有一 ...

组织样本是小鼠脾脏单细胞，CD45单染这管是为了调补偿设的，上机前补加了一些未染色的脾脏单细胞；CD3这管是正常染色，未额外补加细胞

土土虎

niwanmao 发表于 2025-1-22 19:10
我不知道你分别用什么细胞作为阴性群？
CD45阴性群体正常不会存在这么多，正常白细胞CD45全阳性，只有一 ...

懂了，谢谢站长！