小鼠腹腔m1/m2巨噬/单核细胞流式检测方案

student

各位老师们好！我打算做小鼠腹腔m1/m2巨噬细胞和单核细胞检测，以及小鼠外周血单核细胞检测，我分享下我的染色和检测方案，同时有几个问题想请站长倪老师和各位老师帮我看一下：

1:外周血单核细胞（cd45+ cd11b+ ly6g- ly6c+）染色用的指标合理吗？

2：腹腔单核（cd45+ cd11b+ f4/80- ly6c+）M1巨噬（cd45+ cd11b+ f4/80+ cd86+）和M2巨噬（cd45+ cd11b+ f4/80+ cd206+）染色用的指标合理吗？

3:对照管（fmo管）的选择有没有问题？

4:检测方案还有没有需要完善的地方？

欢迎站友们一起来交流探讨，如果有细节需要提供的话请在评论区留言！

小鼠外周血单核染色方案：

外周血单核：cd45+ cd11b+ ly6g- ly6c+

对照管：fmo-ly6c

腹腔巨噬/单核染色方案：

M1：cd45+ cd11b+ f4/80+ cd86+

对照管：fmo-cd86

M2：cd45+ cd11b+ f4/80+ cd206+

对照管：fmo-cd206

腹腔单核：cd45+ cd11b+ f4/80- ly6c+

对照管：fmo-ly6c

小鼠外周血单核检测方案：

1、小鼠心脏取血

2、取100ul血液，直接加所有抗体（cd45、cd11b、ly6g、ly6c），4度孵育40min

3、直接加ebioscience裂红液2ml，4度10min后，500g离心5min去裂红液，pbs重悬上机

腹腔巨噬检测方案：

1、fc受体阻断剂室温孵育15min

2、加表染抗体cd45、cd11b、f4/80、cd86，ly6c，4度孵育40min，离心去抗体

3、ebioscience固定破膜套装进行固定破膜

4、100ul破膜液重悬后加cd206抗体，4度孵育40min，离心去抗体

破膜液重悬上机检测

niwanmao

看起来问题不大，蛮完善的

不过建议Fc阻断，无论是腹腔还是外周血，都建议做进去

抗体用量，要注意做好滴定

student

niwanmao 发表于 2025-2-12 23:55
看起来问题不大，蛮完善的

不过建议Fc阻断，无论是腹腔还是外周血，都建议做进去

好的，感谢倪老师指点