FSC-A VS FSC-H图形异常

Bruce_Shi

各位老师：
公司原有一台新的贝克曼Cytoflex流式仪，现购买了相同型号的二手细胞仪，两台仪器QC是每天都做可以通过。
在检测人外周血样本，处理流程：裂红——表面染色——清洗——上机收集数据。同一样本在两台仪器间比对。发现二手设备在去粘连那张图异常，请问是什么原因啊？
而且我在做胞内maker检测时发现，细胞破膜后，无论如何调整 FSC与SSC电压，淋巴那一群的位置都不会变化。难道是488激光对细胞偏了吗？

niwanmao

CytoFLEX机型，用SSC-A/SSC-H排除粘连体更好

你这里的FSC这个问题不大，坐标放大可调。

至于FSC/SSC的分群，我倒觉得如果是同一个样本，反而是二手机器的分群更好看

happyeday

您为什么觉得去粘连图有异常？我也觉得二手的机器第一张图分群更清晰。
至于您说调电压位置没有改变，会不会是您选择了自适应，cytoflex有一个功能，勾选自适应坐标轴后，它可以自己找细胞群。可能机器就认为细胞群现在的位置是最适位置。最好发个图来看看。

范晋波

两台机器的质控靶值并不是说一定是固定值，他是一个范围值，所以在同样电压下，图并不能完全一致，而且质控过的阈值是2%，但不代表两台CV值完全一样，可能一个是1%，一个是1.99%，所以这种完全一样的图不容易做出来，质控过了，保证实验检测是可信的即可

Bruce_Shi

happyeday 发表于 2025-3-3 16:29
您为什么觉得去粘连图有异常？我也觉得二手的机器第一张图分群更清晰。
至于您说调电压位置没有改变，会不 ...

破膜后的细胞，我尝试了调节FSC和SSC的增益，lym那一群尤其是FSC-A几乎没有变化，而且图形很是怪异，是不是增益太大了啊？
红色lym，其他的染色没放

Bruce_Shi

niwanmao 发表于 2025-3-3 15:41
CytoFLEX机型，用SSC-A/SSC-H排除粘连体更好

你这里的FSC这个问题不大，坐标放大可调。

好的，谢谢。
我是看到了论坛里的一篇帖子，对于去粘连问题好奇：https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6868-1-1.html?_dsign=075762d4
其实新仪器的FSC的电压可以高一些，让图好看，我懒得弄了

Bruce_Shi

范晋波 发表于 2025-3-4 09:48
两台机器的质控靶值并不是说一定是固定值，他是一个范围值，所以在同样电压下，图并不能完全一致，而且质控 ...

谢谢普及，细胞只是表染的话，对结果没有影响
但是，在做胞内染色时，机器收集数据时，丢弃率很高，且使用宽度（W）时，图形很奇怪。
我放两张图，同一样本，但在新旧两台机器上机，二手（旧）机器有W时很奇怪，不知时图还是数据问题

niwanmao

Bruce_Shi 发表于 2025-3-4 11:09
谢谢普及，细胞只是表染的话，对结果没有影响
但是，在做胞内染色时，机器收集数据时，丢弃率很高，且使 ...

这两个图倒是新机器好

前面顶楼的图有标反吗？

happyeday

Bruce_Shi 发表于 2025-3-4 10:50
破膜后的细胞，我尝试了调节FSC和SSC的增益，lym那一群尤其是FSC-A几乎没有变化，而且图形很是怪异，是不 ...

您是说这前两图是不同增益吗？您看他们的坐标轴都不一样啊！

hurunhuan

Bruce_Shi 发表于 2025-3-4 11:09
谢谢普及，细胞只是表染的话，对结果没有影响
但是，在做胞内染色时，机器收集数据时，丢弃率很高，且使 ...

旧机器可以看看FSC-H对FSC-W，如果图像没有差异的话，可能是A/H的数据没有对齐好。BD的仪器上叫Area Scaling Factor。