关于细胞周期没有G2期峰

louxiulan

做细胞周期的时候总是拟合出来这样的图，本身没有出现第二个峰或者说S期不明显是为什么，是细胞状态的原因还是操作过程出了问题

                               
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hurunhuan

细胞周期一般看A通道，不是H通道。

louxiulan

hurunhuan 发表于 2025-3-17 10:56
细胞周期一般看A通道，不是H通道。

A通道更不好根本没拟合出来，才选的H通道呢

niwanmao

需要看你的细胞特性和实验处理因素

一种可能是S期阻滞，另一种可能是染料染色没染充分，导致G2/M期和G0/G1期的比值不足<1.8

可以尝试不同的细胞密度做做看

louxiulan

niwanmao 发表于 2025-3-17 14:10
需要看你的细胞特性和实验处理因素

一种可能是S期阻滞，另一种可能是染料染色没染充分，导致G2/M期和G0/G1 ...

谢谢老师解答，染料用的是hoechst33342，37度孵育30分钟，这次细胞密度是3*10^5个，细胞是经过慢病毒转染过的细胞，但是对照空转的细胞也没有出现第二个峰，是一开始细胞铺多一点好呢还是少点好？

niwanmao

louxiulan 发表于 2025-3-17 14:27
谢谢老师解答，染料用的是hoechst33342，37度孵育30分钟，这次细胞密度是3*10^5个，细胞是经过慢病毒转染 ...

这个密度是可以

另外你的流式细胞仪是否支持调节电压？如支持，建议先拿确定含G2峰和G0/G1峰的标本，使得G2/G1比值尽量接近2

hurunhuan

louxiulan 发表于 2025-3-17 11:14
A通道更不好根本没拟合出来，才选的H通道呢

细胞周期需要低速上样，最好每秒200个左右，再用荧光通道的A和H，或者A和W圈一个去粘连的门在看看。另外，染料浓度过高或过低或染色时间不够，都可能导致G2/M期的峰无法显示。

louxiulan

hurunhuan 发表于 2025-3-17 16:02
细胞周期需要低速上样，最好每秒200个左右，再用荧光通道的A和H，或者A和W圈一个去粘连的门在看看。另外 ...

好的，感谢您。我再去试试

louxiulan

niwanmao 发表于 2025-3-17 16:02
这个密度是可以

另外你的流式细胞仪是否支持调节电压？如支持，建议先拿确定含G2峰和G0/G1峰的标本，使 ...

可以的，是贝克曼的机子。我再研究研究，谢谢老师的解答