PBMC的散点图为什么成这样了？

chujindong

我一直用的是单个核细胞（PBMC）来做实验，一般情况下都是这样

淋巴细胞群比较集中，但是前两天做的细胞时这样的

虽然似乎没影响后面分析，但仍然想弄明白这个问题，请大家解答。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-10-31 20:19

                               
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SSC可能是有差别的，但是应该相差很小。标本是复苏的细胞，提取的时候放置的时间不长，我一般处理得挺快 ...

如果是复苏的细胞，出现这样的图形就很正常了。细胞经过冻存之后，SSC等性状肯定会发生变化，碎片也会比较多。

tree1004

分析你的图有两个特征：
1.细胞碎片较多。
2.细胞总数较多。
据你的图来看，可能是血液样品放置时间较长引起的细胞凋亡。

niwanmao

SSC电压没动过吧？
感觉细胞碎片是挺多的，提取之后怎么还会有这么多碎片呢，标本放置时间长吗？

chujindong

niwanmao 发表于 2011-10-31 13:21

                               
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SSC电压没动过吧？
感觉细胞碎片是挺多的，提取之后怎么还会有这么多碎片呢，标本放置时间长吗？ ...

SSC可能是有差别的，但是应该相差很小。标本是复苏的细胞，提取的时候放置的时间不长，我一般处理得挺快。

chujindong

tree1004 发表于 2011-10-31 13:04

                               
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分析你的图有两个特征：
1.细胞碎片较多。
2.细胞总数较多。

细胞总数多是因为计数多，CD3计数10000，自然图上细胞很多。提细胞的时候有时会发现有一些细小碎片，不知道是什么东西，总觉得是血小板。不知道有没有做过血小板的战友指导一下？

sfqiang23

fsc的电压是不是太低啊？我做的最左边还有1团细胞，为什么选门时只选右边一团啊？那应该是单核细胞吧
单个核细胞提取出来后不能及时上机分析，用1%多聚甲醛固定可以吗？最多能在多长时间内分析结果不受影响？哪位高人能不能传一张正常的pbmc散点图？刚接触流式，还望各位多多指点。

niwanmao

sfqiang23 发表于 2011-11-2 22:29

                               
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fsc的电压是不是太低啊？我做的最左边还有1团细胞，为什么选门时只选右边一团啊？那应该是单核细胞吧
单个 ...

不是FSC电压低的缘故，楼主的图片最左边那团是细胞碎片。右边最浓的那团才是状态正常的淋巴细胞，最最右边那群比较稀松的是单核细胞。
单个核细胞包括淋巴和单核，但一般情况下是淋巴为主。

如果没法及时上机，是可以用多聚甲醛固定的。多长时间内分析结果不受影响，有站友做T细胞亚群时做过测试：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... =1759&fromuid=1

sfqiang23

我做内皮祖细胞的，收集了100000个细胞，pbmc散点图（FFC/SSC）是这样的,可能原因是什么？应该怎么调节啊？

niwanmao

sfqiang23 发表于 2011-11-3 23:37

                               
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我做内皮祖细胞的，收集了100000个细胞，pbmc散点图（FFC/SSC）是这样的,可能原因是什么？应该怎么调节啊？ ...

以下是我帮你分的细胞群，应该还行吧，只是碎片稍微偏多一点。一般来说，碎片这群信号有时候也包含了干扰信号，想要绝对没碎片是不可能的，因为一个是细胞不可能100％都不死，另一个是细胞获取过程中不可能完全没有一点干扰信号。细胞取的越多，这群碎片就会越明显，但比例基本上是固定的。