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悬赏1流星未解决
如题，请教各位老师，人外周静脉血，EDTA采血管采血，经Ficoll淋巴细胞分离液提取，刺激前台盼蓝染色细胞活率60-80%，PMA 50ng/ml+离子霉素1μg/ml刺激5小时，按照说明书使用蛋白转运抑制剂，标志CD3-APC-Cy7，CD4-APC，IFNg-PerCP-Cy5.5，IL-4-PE，IL-17a-FITC标志，奇怪的是，IL-4-PE单染管和样本全染管中Th没有见到分群，其他Th标志物及分群都没有问题，如图所示：
请问各位老师这种情况是因为抗体还是刺激方式出错的原因？或细胞数量问题（但上机时能够录到1万个细胞）？我尝试过不用刺激培养，直接破膜染色，除了IL-17a+、IFNg+比例稍有下降，得到IL-4+单阳管与全染管仍然是以上的表现，上机时调节电压，无显著变化，仍然没有分群。问题可能出在哪？
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