用鼠抗人抗体查人T细胞内细胞因子之前需要先用鼠血清封闭

xyhongjin

用鼠抗人抗体查人T细胞内细胞因子之前需要先用鼠血清封闭人淋巴细胞表面的FcR吗？实验室老师说不需要？我不太确定！请各位前辈指点！

niwanmao

以前很多抗体都是多克隆抗体，所以需要封闭，以减少非特异结合的背景。现在基本上都是单克隆抗体了，所以就不需要了。

xyhongjin

niwanmao 发表于 2011-11-2 06:51

                               
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以前很多抗体都是多克隆抗体，所以需要封闭，以减少非特异结合的背景。现在基本上都是单克隆抗体了，所以就 ...

请问倪老师有这方面的参考文献吗？

niwanmao

xyhongjin 发表于 2011-11-2 20:33

                               
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请问倪老师有这方面的参考文献吗？

这是基本原理，不需要参考文献。

chujindong

niwanmao 发表于 2011-11-2 06:51

                               
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以前很多抗体都是多克隆抗体，所以需要封闭，以减少非特异结合的背景。现在基本上都是单克隆抗体了，所以就 ...

但是现在的操作步骤还是有这一步骤啊，用BSA或者血清。我觉得无论如何，加上这一步骤，都不会有错，最多浪费点时间。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-11-3 13:36

                               
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但是现在的操作步骤还是有这一步骤啊，用BSA或者血清。我觉得无论如何，加上这一步骤，都不会有错，最多 ...

主要是没有必要。即使要用，也得看情况，例如检测LAMBDA、KAPPA等轻链时，就得把血清彻底洗干净。

rogasan

这个不是没有必要, 如果是检一些表达量比较高的细胞因子的话, 是可以不用封闭,  但如果是检测转录因子之类表达量很低的蛋白的话, 是非常非常的必要.....

kinsuo

rogasan 发表于 2012-1-1 20:33

                               
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这个不是没有必要, 如果是检一些表达量比较高的细胞因子的话, 是可以不用封闭,  但如果是检测转录因子之类 ...

原来如此啊，学习了！