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[淋巴细胞相关] 小鼠原代树突状细胞圈门问题

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发表于 2025-5-2 16:27:43 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决

图1.圈左下角时,是树突状细胞最多的位置

图1.圈左下角时,是树突状细胞最多的位置

图2.圈淋巴细胞群常见位置时,树突状细胞最少

图2.圈淋巴细胞群常见位置时,树突状细胞最少

图3.圈中间这一群时,死细胞最多

图3.圈中间这一群时,死细胞最多

图4-1.cDC1亚群CD80单染管

图4-1.cDC1亚群CD80单染管

图4-2.cDC2亚群CD80单染管

图4-2.cDC2亚群CD80单染管

图5.CD80 FMO管

图5.CD80 FMO管

图6.CD80全染管

图6.CD80全染管
图7.来自同一只小鼠的空白管cDC1.png
图7.来自同一只小鼠的空白管cDC2.png

图8.电压

图8.电压

图9基线报告1

图9基线报告1

图9基线报告2

图9基线报告2

图10性能评估1

图10性能评估1

图10性能评估2

图10性能评估2
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 楼主| 发表于 2025-5-2 17:01:39 | 显示全部楼层
本帖最后由 sdl1991shi 于 2025-5-2 17:14 编辑

我一直有一个疑问,很多教程都说SSC和FSC通道中左下角靠近0位置的都是细胞碎片,但是我在流式圈门树突状细胞时,大多数的树突状细胞cDC1和cDC2都集中在左下角。
想请大家帮忙看看,其中,BV421是死活染料,APC是CD11c,APC-R700是MHCII,BV650是XCR1(cDC1),Percp-cy5.5是CD172a(cDC2)

问题:1.想知道是不是大多数DC细胞都在左下角这个问题,因为很多人都告诉我左下角都是细胞碎片,我想知道细胞碎片也可以染色成功,最后被圈门吗
2.中间这一群是不是就代表着死细胞所在的位置
3.如果DC真的在SSC和FSC左下角的位置,我不明白它为什么会这么靠下,和电压没什么关系,因为我在至少3个流式分析仪和分选仪上机,都是在最下方,而且我电压不低啊

4.究竟应该按照单染管的界限圈门,还是按照FMO管的位置圈门
     在BV650:cDC1亚群中CD80的圈门位置:按照图4的单染管圈在10*3次方的位置,按照CD80的FMO管圈在接近0次方的位置,为什么单染管和FMO管的圈门位置会差这么多。
     在PerCPCY5.5:cDC2亚群中,单染管CD80的阴阳性群在10*3次左右的位置分群明显,但在全染管和FMO管中cDC2亚群几乎是阴性的的,没有阳性细胞,这是为什么呢,这些都来自于同一只小鼠的脾脏啊,是因为我用了的染料有4种都是BrilliantViolet 大分子染料的原因吗


恳请各位大佬帮忙解答一下,非常非常感谢各位了,谢谢,谢谢
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发表于 2025-5-4 16:39:56 | 显示全部楼层
sdl1991shi 发表于 2025-5-2 17:01
我一直有一个疑问,很多教程都说SSC和FSC通道中左下角靠近0位置的都是细胞碎片,但是我在流式圈门树突状细 ...

图1-6和图7-8,都是在同一台机器同一条件下获取的吗?
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 楼主| 发表于 2025-5-5 17:22:27 | 显示全部楼层
本帖最后由 sdl1991shi 于 2025-5-5 17:30 编辑
niwanmao 发表于 2025-5-4 16:39
图1-6和图7-8,都是在同一台机器同一条件下获取的吗?

是的,所有的图都是在同一个机器上运行的,型号BD FACSCelesta。整个流式所用的荧光染料很多,有十几支,占了10个荧光通道,该机器是12色机器,上机前2周我刚刚做过CST质控。另外附上图8.电压数值。谢谢老师
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发表于 7 天前 | 显示全部楼层
sdl1991shi 发表于 2025-5-5 17:22
是的,所有的图都是在同一个机器上运行的,型号BD FACSCelesta。整个流式所用的荧光染料很多,有十几支, ...

图6的FCS文件,有无可能传一个上来?各个通道的抗体均标识清楚
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