健康人外周血B细胞检测出现CD3+CD19+的群体

maomao

niwanmao 发表于 2025-6-13 09:02
这两个荧光素搭配以前在其它抗体上有没有搭配用过？

只看图形，感觉应该是可以调过去，但是Spreading  E ...

荧光补偿是调不过去的，这个实验以前就做过的，没有问题，就近期出现这个问题，实在是找不到原因，所以来请教大咖们

maomao

Yuck 发表于 2025-6-13 08:50
去上清了那应该也不是这个原因。那得从新梳理找找了。发完整流程吧。仪器、样品来源、操作流程。 ...

其实上面我把信息都写的比较全了，再细一些吧：健康人的外周全血，检测B细胞，取200ul全血到5ml流式管，加入1×RBC裂解液（BD 555899）室温避光裂解15min，确认液体呈透亮色，4℃ 200g 5min离心去上清，再加1ml 1×DPBS洗涤一次，离心去上清，加100ul重悬，加入滴定好量的抗体，室温避光孵育15min，加入1ml 1×DPBS离心去上清，再洗涤一遍，最后300ul重悬上机，仪器是BD FACSCanto II PLUS(3激光10色）

tiger

maomao 发表于 2025-6-13 11:03
其实上面我把信息都写的比较全了，再细一些吧：健康人的外周全血，检测B细胞，取200ul全血到5ml流式管， ...

换一个CD3的克隆号试试

niwanmao

maomao 发表于 2025-6-13 10:53
荧光补偿是调不过去的，这个实验以前就做过的，没有问题，就近期出现这个问题，实在是找不到原因，所以来 ...

做一下CD19和CD3的单染，看看扩散如何

maomao

niwanmao 发表于 2025-6-14 09:46
做一下CD19和CD3的单染，看看扩散如何

这个是正常的，没有问题

maomao

niwanmao 发表于 2025-6-14 09:46
做一下CD19和CD3的单染，看看扩散如何

倪老师，这边也做了很多实验找问题的哈，为啥先染后裂这个就是正常的，先裂后染就出现这种情况？从操作的实验步骤来看，应该是OK的，为啥会有这种差异？

niwanmao

maomao 发表于 2025-6-15 14:44
倪老师，这边也做了很多实验找问题的哈，为啥先染后裂这个就是正常的，先裂后染就出现这种情况？从操作的 ...

那我明白了，先裂后染问题很多的，我们几个进修生回去在日常工作中做淋巴细胞亚群，也经常出现稀奇古怪的现象，包括中性粒细胞CD45莫名其妙增高

所以还是建议老老实实按照传统的先染再裂吧


至于具体原因，目前没有具体的文章去研究，我个人还是首先考虑低渗裂解液对细胞表面的影响，先染色的话已结合的标记不受影响，但先裂解的话虽然白细胞耐裂但是也不可避免受影响，这种影响或许导致抗体结合不上，或者出现你这里所看到的异常染色

maomao

niwanmao 发表于 2025-6-15 15:20
那我明白了，先裂后染问题很多的，我们几个进修生回去在日常工作中做淋巴细胞亚群，也经常出现稀奇古怪的 ...

但是，我们之前做这个实验也是先裂后染，也是没有问题的，只是近期出现，所以没办法理解原因

niwanmao

maomao 发表于 2025-6-16 08:34
但是，我们之前做这个实验也是先裂后染，也是没有问题的，只是近期出现，所以没办法理解原因 ...

如果标本还在，你可以对比先染后裂，你就会发现不同之处。 先染后裂，还是需要坚持的原则。

先裂后染，并不是说所有样本都会出现非特异性染色，但几率会高一些，而且之前之所以觉得没问题，因为可能程度没这么高，这个是个体差异性。

tiger

maomao 发表于 2025-6-16 08:34
但是，我们之前做这个实验也是先裂后染，也是没有问题的，只是近期出现，所以没办法理解原因 ...

封闭了吗？