流式细胞绝对计数的可靠性

chen_yiqian

请教各位老师，我看文献中，在做实质脏器免疫细胞流式，包括肝脏、脂肪、淋巴结、脾脏、大脑、肿瘤等组织时，会根据组织的重量对流式分析得到的绝对数量进行标准化，然后比较。但是有关于肠道固有层免疫流式的结果一般直接计算全肠段的某种免疫细胞数量，不会根据肠道的长度或者重量进行标准化。


我最近受到这个问题很大的困扰，我想到肠道作为空腔脏器，尤其是关注的是固有层的免疫细胞，其分布的数量可能跟绒毛、隐窝的数量有关，或者说体积有关。将肠道类比于实质脏器根据重量进行标准化似乎不科学。

理论上来说，我们如果关注的是隐窝附近的免疫细胞数量，可能得根据绒毛数量进行标准化，然而实际上流式实验中是没有办法实现这个计算的（可能做组织共聚焦可以实现二维的评估），因此，如何对肠道固有层的免疫细胞绝对数量进行标准化会更科学呢，或者说是否需要标准化？

举个例子，我在做流式分析时，发现肠道总细胞数、CD45+细胞、CD3+CD4+细胞、ILC细胞以及Th17细胞等多种免疫细胞在造模小鼠中均相较于对照组显著减少，而造模组的小鼠肠道的长度、重量均显著低于对照组，尤其是肠道重量仅有对照组的一半。在这种情况下，如果直接比较总肠段中的某种亚型的细胞在两组的变化而不对其进行标准化，得到的结果是否可靠或者有意义？

请各位前辈指点，欢迎各位同行一起讨论~

wxd

你的意思是有的细胞亚群占父群比例有变化，但是标准化成绝对计数就没有差异是吗？那之前占父群比例没有差异的细胞亚群标准化之后应该是有差异的。找一下有没有相关的文献支撑或解释你的结果。至于用长度还是用重量进行标准化，这方面我不了解，但是从写文章的角度来说，建议挑一个你自己可以解释的来写。

chen_yiqian

顶顶顶~~

niwanmao

现有的文章，通常都是统计百分比的差异。

如果要计算比较准的绝对数，我觉得你可以把小鼠肠段全部剪碎后酶解成单细胞，计算细胞浓度，乘以单细胞悬液总体积吧

wxd

感觉是需要目标细胞数量除以肠段长度或者重量，进行标准化之后再对比会比较科学。

tiger

niwanmao 发表于 2025-6-19 08:14
现有的文章，通常都是统计百分比的差异。

如果要计算比较准的绝对数，我觉得你可以把小鼠肠段全部剪碎后酶 ...

还应引入脏器系数会更科学

chen_yiqian

niwanmao 发表于 2025-6-19 08:14
现有的文章，通常都是统计百分比的差异。

如果要计算比较准的绝对数，我觉得你可以把小鼠肠段全部剪碎后酶 ...

老师，我是这样做的，通过这样的方式得到最终的绝对计数，但是接下来需要进行标准化，因为实验处理对肠道造成了损害，导致全肠总细胞数显著减少，在这种情况下，得到的所有细胞亚群绝对数量均是显著降低的。

chen_yiqian

tiger 发表于 2025-6-19 09:01
还应引入脏器系数会更科学

老师，您是指用肠道的重量/体重来计算脏器系数对吗。

chen_yiqian

wxd 发表于 2025-6-19 08:49
感觉是需要目标细胞数量除以肠段长度或者重量，进行标准化之后再对比会比较科学。 ...

老师您好，我尝试用长度或者重量进行标准化，但是有两个问题，一是这两个方法得到的结果很不一致，其次是我使用比例进行分析时，有显著改变的细胞亚群，却在计算重量标准化后的绝对数量比较时，所有差异均消失了，所以该如何考虑哪种结果更贴近真实的情况呢？

niwanmao

chen_yiqian 发表于 2025-6-19 11:29
老师，我是这样做的，通过这样的方式得到最终的绝对计数，但是接下来需要进行标准化，因为实验处理对肠道 ...

你是如何得出所有亚群绝对数均显著降低的结论呢？这说明你已有金标准的手段？