扩散误差，老生常谈，我还是觉得非常多人不懂，再谈一下自己理解

Veblen

要了解扩散误差SSE，需要了解几个概念；

1. spillover，也就是一个染料的发射光会漏到其他检测通道，这种现象叫spillover；
2. spillover spreading，漏到其他通道的发射光信号，通过调补偿/unmix的方式后，还存在一定信号的拖尾现象，这个拖尾很自然也就是出现在相邻的阴性通道，这种现象叫spillover spreading；
3. spillover spreading error， 第二步形成的拖尾，这个尾巴的长度(也就是占据阴性通道的宽度)的值，也就是扩散误差的大小。这个值越大，阴性峰的信号CV也就越大，导致阴性峰变宽，容易覆盖在该通道上的一些弱阳性信号，这就是扩散误差。
以上是自己的理解，欢迎批评指正。
但是，说了这么多，我自己还是不明白，扩散误差的根据，有点的说是探测器光子计数的泊松噪声引起的，其实我根本不懂什么是“光子计数的泊松噪声”？所以一直寻求扩散误差产生的根源，我觉得真的很难理解，谁能简单直白的解释一下，让大家以及很多人能听懂就好啦，感谢感谢~
另，如果一个荧光素的发射光不漏到其他通道，是不是扩散误差就没有，相当于是0，对吗？

hezeljgouc

spreading error大部分是由光子计数误差导致的，可以大致这样理解，假如某通道PMT检测效率40%，荧光素发出1000个光子，理论上PMT应该能检测到（即发生光电转换）400个，但是实际上检测到的值可能在一定范围内变动（比如370-430，符合泊松分布），相应的该通道荧光信号（电信号→数字信号）也即产生误差，这个误差就是spreading error，和待测光强度的平方根正相关。spreading error本质上反映的是仪器本身的检测性能，不管有没有补偿（比如单染情况下），该通道的spreading error都存在；但是由于阳性信号强度值远大于误差，我们在图上看不出来。在多色流式实验中，必须进行的补偿（线性计算）过程消除了荧光溢漏（线性关系），即溢漏导致的假阳性群体经补偿计算会变成阴性群体；但是补偿不能消除由荧光溢漏引入的spreading error（非线性关系），反而由于补偿后该阴性群体荧光信号强度很小，误差就会变的很明显。也就是说spreading error不是由补偿导致的，但是经补偿的流式图上（log坐标轴或logicle坐标轴）上阴性群体（如果spreading error比较大）会变成一个大鱼尾巴一样的图形，即阴性群体的CV值变的很大，严重影响该通道的分辨率。

hurunhuan

理解没问题。
荧光素产生的光子的能量是确定的，但是光子在行进过程中总会遇到一些随机事件，造成能量升高或者降低（能量改变导致波长改变，比如红移和蓝移），并且，透镜的效率也不是100%，总会有预期之外的光子进入，这就导致出现了spillover spreading。
荧光素的发射光不漏到其他通道是理想状态下的理论情况，这种情况扩散误差就没有的。但是现实必然会有漏到邻近的通道的。

niwanmao

若有啥不确定的东西，就往量子理论去靠

Veblen

hurunhuan 发表于 2025-6-24 08:50
理解没问题。
荧光素产生的光子的能量是确定的，但是光子在行进过程中总会遇到一些随机事件，造成能量升高 ...

谢谢，我的理解是溢漏到相邻通道的发射光，不仅是它自己本身，它可能会携带其他的一些光子进入，就算调节了荧光补偿(也就是调节了溢漏到临近通道的发射光本身)，但是携带的其他光子还是会存在于相邻通道，对相邻通道的信号产生影响。
欢迎修正哈

Veblen

hezeljgouc 发表于 2025-6-24 01:26
spreading error大部分是由光子计数误差导致的，可以大致这样理解，假如某通道PMT检测效率40%，荧光素发出1 ...

非常感谢，形象生动，谢谢老师。