流式细胞术通过单核细胞表面FVIII水平，可预测血栓风险

niwanmao

在人体血液的舞台上，凝血因子VIII（Factor VIII, FVIII）是不可或缺的演员。它在血液凝固过程中发挥关键作用——缺失它会引发严重的出血性疾病如血友病A，而过量则可能导致血栓、心肌梗死乃至中风。那么，FVIII在体内究竟如何活动？尤其是它如何与血液细胞表面的结合有关？这正是Al-Mohannadi A等人在《Cells》期刊2025年发表的《Flow Cytometry Evaluation of Blood-Cell-Bound Surface FVIII in Hemophilia A and Thrombosis》要探索的科学命题。

通常，FVIII主要通过血浆中的测定来评估。然而临床发现，某些血栓患者FVIII水平并不总是升高，而某些血友病患者则在不同细胞中发现了残余FVIII。研究团队指出，这背后可能存在一个尚未被充分认知的机制：FVIII是否可能通过其C2结构域附着于血细胞表面，特别是在某些细胞亚群中，如单核细胞？而这类表面附着是否具有疾病预测或诊断价值？

于是，研究者基于流式开发并优化了检测血细胞表面上的活性FVIII（aFVIII）的方法，并系统性地对比了49名儿童患者中不同凝血状态的白细胞FVIII表达情况。

技术核心是基于Zenon技术标记的抗FVIII抗体检测，实验步骤如下：
1. 样本预处理：裂解红细胞，洗涤两次后保留外周单个核细胞（PBMC）。
2. 活性染色：使用Zombie UV™活细胞染料确认细胞活性，再加入Zenon-labeled抗-FVIII抗体（GMA8024克隆），抗体用量经预实验优化（0.25–4 μg）。
3. 免疫表型设门：

• 淋巴细胞：CD3+CD4+（辅助T细胞）、CD3+CD8+（细胞毒T细胞）、CD3-CD19+（B细胞）；
• 单核细胞：CD14+CD33+；
• 粒细胞：CD16+；
  

FVIII阳性率：抗-FVIII抗体与IgG同型对照的比例差值

结果如何？
研究结果最有意思的一点是：FVIII在白细胞表面的表达水平，随着凝血状态不同而呈现出“阶梯式”的变化：
血栓患者白细胞表面FVIII显著升高（平均0.278%），尤其是在血栓发作1周以内者；
正常对照组中等表达；
* 血友病A患者最低，仅为0.067%，差异具有统计学意义（p = 0.0401）。



更进一步分析中，研究者惊讶地发现：血浆中FVIII水平与白细胞表面FVIII没有显著相关性。这说明FVIII与细胞结合并非单纯“被动吸附”，可能存在主动识别或受体介导的结合机制。

哪类细胞最容易携带FVIII？

细胞亚群分析显示，CD14+/CD33+经典单核细胞是FVIII“最青睐”的细胞类型：
血栓患者单核细胞表面FVIII高达0.595%，而在血友病患者中仅为0.058%，在正常对照中仅为0.07%；
粒细胞和T/B淋巴细胞中的表达变化不明显。




这些发现再次强化了一个认识：单核细胞在血栓形成中起关键作用，它们不仅参与炎症反应，也可能通过表面携带FVIII参与局部凝血过程，甚至释放组织因子和形成细胞外捕获网（ETs），加剧凝血反应。

FVIII是否可以作为血栓预测标志物？

研究者利用逻辑回归分析和ROC曲线评估FVIII的预测能力。结果显示，CD14+CD33+单核细胞表面FVIII可有效区分血栓状态与其他状态（AUC = 0.88, p = 0.01）。

尽管本研究样本量有限（n=49），且使用的是临床剩余血液（存在异质性），但其所得结论依旧令人振奋。研究者指出，未来若扩大样本、结合纵向观察及机制研究，有望推动FVIII从传统血浆检测迈向“细胞水平”精准诊断。


参考文献：Al-Mohannadi A, Yahia RM, Bibawi H, et al. Flow Cytometry Evaluation of Blood-Cell-Bound Surface FVIII in Hemophilia A and Thrombosis. Cells. 2025;14(2):73. Published 2025 Jan 8. doi:10.3390/cells14020073